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序列相似性家族3A在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的作用
目的 评估序列相似性家族3A (Fam3A)在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤中的作用.方法 将HUVECs分为对照组和高糖组,分别给予5.5 mmol/L葡萄糖的内皮细胞培养基(ECM)和33.3 mmol/L葡萄糖的ECM培养,RT-qPCR法检测Fam3A mRNA的表达,ELISA法检测Fam3A蛋白的表达.分别用siNT和siFam3A转染对照组和高糖组HUVECs,检测细胞内活性氧簇(ROS)含量、ATP水平、线粒体氧耗率(OCR)和P-p38蛋白表达情况.结果 培养24h后,高糖组Fam3A mRNA与对照组的相对表达量为2.52 ±0.19,差异有统计学意义(t=13.296,P=0.000);Fam3A蛋白浓度为(173.82±33.28) pg/ml,明显高于对照组的(39.45±33.78) pg/ml(t=4.907,P=0.006).siNT高糖组细胞内ROS含量为(8217 ±794) RFU,明显高于siNT对照组的(3982 ±398) RFU(t=15.109,P =0.002);siFam3A高糖组细胞内ROS含量为(11 910±1 001) RFU,明显高于siFam3A对照组的(4171 ±402) RFU(t=9.705,P=0.010)和siNT高糖组(t=4.026,P=0.048).以siNT对照组ATP合成量为基线,siNT高糖组、siFam3A对照组和siFam3A高糖组细胞内ATP合成相对值分别为(61.2±5.6)％、(94.6±8.4)％和(29.7±2.7)％,siNT高糖组明显低于siNT对照组(t=12.001,P=0.007),siFam3A高糖组明显低于siFam3A对照组(t=20.742,P=0.002)和siNT高糖组(t=18.814,P=0.003).siNT高糖组的线粒体OCR为(0.57±0.05) pMO2/(μg蛋白·min),明显低于siNT对照组的(1.12±0.09)pMO2/(μg蛋白·min)(=6.804,P=0.021);siFam3A高糖组的线粒体OCR为(0.31±0.03) pMO2/(μg蛋白·min),明显低于siFam3A对照组的(1.01 ±0.09) pMO2/(μg蛋白·min)(t=19.876,P=0.003),也明显低于siNT高糖组(=21.444,P=0.002).以siNT对照组为基线,siNT高糖组、siFam3A对照组和siFam3A高糖组的P-p38相对表达量分别为2.239±0.353、0.816±0.120和1.160 ±0.185,siNT高糖组明显高于siNT对照组(=6.075,P=0.026),siFam3A高糖组明显高于siFam3A对照组(t=6.242,P=0.024),低于siNT高糖组(t=9.686,P=0.010).结论 高糖可以诱导HUVECs高表达Fam3A.敲低Fam3A基因表达可加重高糖引起的ATP合成减少及线粒体OCR降低,同时促进高糖时ROS生成增多.Fam3A可能是通过p38 MAPK信号通路调节高糖诱导的HUVECs内ROS生成.
