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抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓效果的研究
目的研究抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力.方法通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞(变异株)与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合,获得分泌双特异性单抗(bsMcAbs)杂交-杂交瘤细胞.采用ELISA法检测该bsMcAbs与纤维蛋白和尿激酶的结合力.用131I血浆-血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力.用兔血栓模型测定体内溶栓效力.结果获得8株分泌抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单抗的杂交-杂交瘤细胞.ELISA实验证明bsMcAbs与纤维蛋白和尿激酶均有很强的结合力.体外溶栓实验证明bsMcAbs可使尿激酶的溶栓效力增强15.5%.体内溶栓实验证明bsMcAbs的溶栓效力为尿激酶的1.6～2.1倍.结论单抗导向溶栓剂具有高度特异性和局部溶栓效力强等优点,值得进一步研究.
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细胞融合法制备抗人CD3-抗人IgM μ链双特异性抗体
目的制备抗人CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交-杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定.方法将抗人CD3单克隆抗体细胞株采用8-AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株.再通过FuGENETM6转染含neo基因质粒pCDaA3,制备成具有双标记杂交瘤αCD3 HATsG418R亚系,与抗人IgMμ链单克隆抗体细胞株融合.通过ELISA法及流式细胞仪筛选,制备分泌BsAb的细胞株.结果融合6次,共接种1 080孔,共得5株抗CD3-抗IgM杂交-杂交瘤.经亚克隆后,其中2株体外连续传代培养2月仍保持良好的分泌BsAb功能.结论采取细胞融合法可成功制备分泌BsAb的杂交-杂交瘤,其稳定性及效价与亲本杂交瘤相似.
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抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定
目的制备人IgG检测用双特异性单克隆抗体诊断试剂.方法用人IgG免疫BALB/c小鼠脾细胞与抗HRPMcAb杂交瘤细胞HAT敏感株进行第2次融合.结果获得5株能稳定分泌抗人Ig-抗HRP的双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤细胞,分泌的抗体亚类其中1株为IgG2a/IgG1,余为IgG1/IgG1.培养上清与腹水效价分别为2-7,10-5以上,经HRP亲和层析有2个蛋白吸收峰,BsMcAb存在于第2峰.用ELISA法及免疫印迹试验证明:BsMcAb只与人IgG有特异性反应.杂交-杂交瘤细胞连续3月培养和反复冻存,复苏后仍能稳定保持分泌BsMcAb的能力.结论该方法制备简单,灵敏高度,具较好的应用前景.
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抗HIV p24和人A型红细胞双特异性单克隆抗体的研制
目的:制备抗HIV p24和人A型红细胞双特异性单抗(mAb),并建立检测HIV p24的间接血凝试验.方法:将分泌抗HIVp24 mAb的杂交瘤株2-E4和分泌抗人A型红细胞mAb的杂交瘤株S2,分别用8-Ag和5-BrdU驯化,使成为HAT敏感株.将两者常规融合,筛选分泌双特异性mAb的杂交-杂交瘤株.然后制备并纯化双特异性mAb,用其建立的间接血凝法检测p24.结果:共获得6株杂交-杂交瘤细胞株,以其分泌的双特异性mAb建立了检测HIV p24的间接血凝法,敏感性可达400 ng/L.结论:获得可稳定分泌双特异性mAb的杂交-杂交瘤株,并用纯化的双特异性mAb建立了快速检测HIV p24的间接血凝法.
