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siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响
目的 探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平.结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P<0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P<0.01).结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关.
关键词： 结肠癌转移相关基因1(MACC1) 宫颈癌 增殖 侵袭 -
MACC1基因表达下调对卵巢上皮性癌细胞SKOV3顺铂敏感性的影响
目的:探讨通过RNA干扰技术沉默MACC1基因的表达对卵巢上皮性癌细胞SKOV3顺铂敏感性的影响及其可能机制.方法:前期构建的针对MACC1 mRNA的小发卡状RNA重组表达载体转染卵巢癌SKOV3细胞,获得MACC1基因表达下调的shRNA-MACC1-SKOV3细胞.RT-PCR及Westem blot检测MACC1 mRNA和蛋白表达,并检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白含量的变化以及ERK1/2通路抑制剂PD98059对上述蛋白水平的影响.四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测shRNA-MACC1-SK-OV3细胞顺铂敏感性变化.同时设置空白组(SKOV3细胞)和转染空质粒组(SKOV3/DDP-EGFP细胞)为对照组.结果:(1) shRNA-MACC1-SKOV3细胞的MACC1 mRNA和蛋白明显降低.(2) shRNA-MACC1-SKOV3细胞p-ERK1/2表达明显降低,在此基础上加入PD98059后p-ERK1/2表达改变更为明显. (3)shRNA-MACC1-SKOV3细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50)为(20.420±1.437)μmol/L,明显低于空白组和转染空质粒组[分别为(28.168±0.899)和(27.071±1.229)μmol/L.结论:SKOV3细胞中MACC1基因表达下调导致细胞对顺铂的敏感性增加,可能与下游的ERK1/2通路受到抑制有关.
关键词： 结肠癌转移相关基因1(MACC1) 卵巢癌 ERK 顺铂
