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主要组织相容性复合物Ⅱ对Graves病发病影响的研究
目的 应用主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ与人TSH受体(TSHR)共表达细胞(hM12细胞)模拟Graves病(GD)时的甲状腺细胞,免疫C57BL/6小鼠,诱导GD动物模型,以研究异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子是否是GD的致病因素.方法 试验组C57BL/6小鼠8只,用hM12细胞进行腹腔免疫,每2周1次,共6次,对照组C57BL/6小鼠5只,用M12细胞免疫,方法同试验组.受试小鼠末次免疫5周后,检测以下指标:甲状腺激素水平;甲状腺刺激性抗体(TSAb);甲状腺组织学检查.结果 C57BL/6小鼠试验组2/8小鼠诱导为Graves甲亢.C57BL/6小鼠的T细胞(MHC-Ⅱ为H-2b)不能识别由hM12细胞(H-2d)提呈的抗原,C57BL/6小鼠出现GD样变化可能是hM12细胞表达的TSHR被小鼠体内职业性抗原递呈细胞(APCs)获取,经加工处理提呈给T细胞,诱发自身免疫反应的结果.结论 异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子可能与GD的发病无关,而是一种自身免疫反应的继发现象.
关键词： 主要组织相容性复合物Ⅱ 促甲状腺素受体 M12细胞 格雷夫斯病 -
MHC-Ⅱ类分子与hTSH受体共表达系统的建立
目的:应用电击基因导入法,建立MHC-Ⅱ类分子与hTSHR共表达体系(hMl2),为GD发病机制的研究奠定基础.方法:采用电击基因导入法将质粒pCRTM3-hTSHR转染于M12细胞(H-2d),应用G418筛选出阳性细胞,经有限稀释获得单克隆细胞株.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测单克隆细胞内hTSHR胞外段mRNA的表达;用甲亢病人血清粗提IgG及bTSH刺激后测定上清中cAMP值以检测单克隆细胞株表达的hTSHR是否具有天然hTSHR功能.结果:应用有限稀释法获得14株单克隆细胞.RT-PCR结果显示:3号、5号、6号、8号、11号细胞内有高水平的hTSHR胞外段mRNA的转录.应用甲亢病人血清粗提IgG及bTSH刺激后,6号、8号细胞上清中cAMP值明显升高,与对照组之间存在显著差别(P＜0.05).结论:应用电击基因导入法成功地建立了MHC-Ⅱ类分子与hTSH受体共表达体系.
