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重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测
目的 检测重组人白细胞介素-10(recombinant human interleukiu-10,rhIL-10)作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10 的应用提供实验依据.方法 家兔分为6组:①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素(CsA)低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10+CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组.移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射.术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平.结果 ①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组(P<0.05).CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组(P<0.05).{2}移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高(P>0.05),与抗体阳性对照比较有显著差异(P<0.05).结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性.
关键词： 重组人白细胞介素-10 皮肤移植 抗体 -
重组人白细胞介素-10的表达与纯化
目的 表达并纯化重组人白细胞介素-10蛋白,并进行活性检测.方法 将重组质粒PCR[R]T7/NT-TOPO[R]-IL-10转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞,IPTG诱导表达.采用Ni柱对表达产物进行亲和纯化,并检测其对外周血单核细胞分泌TNF-α的影响.结果 IPTG诱导4h,目的 蛋白表达量高,可达45.02%,主要以包涵体形式表达.纯化后,所得目的 产物的回收率为66.72%,纯度约为80.42%.纯化的IL-10对外周血单核细胞分泌TNF-α具有抑制作用.结论 已成功表达并纯化了重组IL-10蛋白.
关键词： 重组人白细胞介素-10 表达 纯化 活性 -
重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析
目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性.方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性.结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Western blot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性.结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础.
关键词： 重组人白细胞介素-10 可溶性蛋白 包涵体 生物学活性 -
rhIL-10对银屑病动物模型的治疗作用及免疫功能的影响
目的研究重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响.方法用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素10的抗银屑病作用,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋巴细胞增殖、NK细胞活性及细胞因子(IFN-γ、IL-2、 IL-1、 TNF-α)水平.结果 rhIL-10(5,20,80 μg*kg-1*d-1,sc)对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用,促进小鼠尾鳞片颗粒层的形成.对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及IL-2、IFN-γ产生有抑制作用;对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1、TNF-α具有抑制作用;对NK细胞活性有抑制作用;对LPS诱导B淋巴细胞增殖有促进作用.结论 rhIL-10可能是通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化,并参与抗炎与免疫调节过程而发挥治疗银屑病动物的作用.
关键词： 重组人白细胞介素-10 银屑病模型 免疫 细胞因子 -
重组人白细胞介素-10对缺氧条件下人肺微血管内皮细胞凋亡的影响
目的 研究低氧条件下,重组人IL-10 (rhIL-10)对人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3( Caspase-3)活性的影响.方法 常规培养HPMVEC细胞株,分为5组:正常对照组(常规培养)；缺氧对照组(50 mL·L-1CO2,950mL· L-1 N2)；缺氧培养并加入rhIL-10,并按rhIL-10剂量(10×103ng·L-1、50x103 ng·L-1、100x 103ng·L-1)分为rhIb-10低剂量干预组、rhIL-10中剂量干预组、rhIL-10高剂量干预组.培养4h、12 h、24 h、48 h离心收集细胞,化学比色法检测细胞核内Caspase3活性,24h核荧光染色并在荧光显微镜下观察荧光强度,并进行统计学分析.结果 4h,凋亡蛋白Caspase-3相对活性各组间无明显差异(P＞0.05);12h,缺氧对照组,rhIL-10低、中剂量干预组与正常对照组比较显著升高(Pa＜0.05),rhIL-10高剂量干预组与正常对照组比较无明显差异(P＞0.05),rhIL-10各剂量干预组与缺氧对照组比较显著降低(Pa＜0.05);24 h,缺氧对照组、rhIL-10各剂量干预组与E常对照组比较显著升高(pa＜0.05),rhIL-10各剂量干预组与缺氧对照组比较明显降低(Pa＜0.05)；48 h,缺氧对照组和rhIL-10低剂量干预组与正常对照组比较显著升高(Pa＜0.05),低、中、高剂量rhIL-10干预组与缺氧对照组比较明显降低(Pa＞0.05)；缺氧凋亡峰值见于24h.24h,各组行凋亡细胞核Hoechst荧光染色,缺氧对照组和rhIL-10低、中、高剂量干预组灰度值与正常对照组比较均显著升高(Pa＜0.05)；rhIL-10低、中、高剂量rhIL-10干预组与缺氧对照组比较显著降低(P.＜0.05).结论 缺氧可促进HPMVEC凋亡,rhIL-10可一定程度地抑制HPMVEC凋亡,这些变化可能与急性缺氧性各器官疾病密切相关.
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重组人白细胞介素-10诱导瘤细胞凋亡
目的研究重组人白细胞介素-10诱导瘤细胞凋亡的作用.方法利用基因工程技术制备的rlIL-10,分别作用于体外培养的ScaBer、NCIS446、U937瘤细胞,观察瘤细胞的形态改变,MTT法检测rhIL-10对瘤细胞增殖的抑制作用,电泳观察rhIL-10诱导瘤细胞凋亡的情况,TUNEL法检测瘤细胞凋亡百分率.结果电泳出现典型的DNA"lader",ScaBer、NCIS446、U937三种瘤细胞的凋亡率为48.5%、45.6%、47.1%,IC50分别为0.043、0.052、0.058 mg/mL.结论 rhIL-10具有显著抑制瘤细胞生长活性、诱导瘤细胞凋亡的作用.
关键词： 重组人白细胞介素-10 细胞凋亡 IC50
