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肿瘤易感基因101的裸鼠荷瘤实验
目的：探讨胃癌细胞SGC7901中高表达的肿瘤易感基因101（TSG101）对肿瘤增殖的作用及机制。方法将不同TSG101表达水平的胃癌细胞亚系接种于裸鼠体内，观察移植瘤生长状况及相关因子的表达。结果 TSG101转染组裸鼠的移植瘤体积明显高于空质粒组与未转染组（P<0.05）。 TSG101转染组瘤组织切片中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达明显高于空质粒组和未转染组（P<0.05）。结论 SGC7901细胞中高表达的TSG101可能通过上调VEGF的表达增强胃癌细胞增殖。
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肿瘤易感基因101在胃癌耐药细胞中的表达及作用
目的探讨肿瘤易感基因(TSG)101在多药耐药胃癌细胞中的表达和作用.方法应用半定量RT-PCR和Western blot方法观察TSG101在胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药亚系SGC7901/VCR中的表达.将TSG101真核表达载体转染SGC7901细胞,通过Western b1ot方法鉴定转染细胞TSG101蛋白的表达.用流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞内阿霉素(ADR)的平均荧光强度.用MTT法检测细胞生长曲线和对VCR、ADR的药敏性.结果胃癌耐药细胞SGC7901/VCR与亲本细胞SGC7901相比,TSG101的表达明显增高.SGC7901细胞转染TSG101真核表达载体后其表达较对照细胞明显增高,G1期细胞比例减少而S期比例增加,细胞增殖加快,且对VCR、ADR的敏感性减低,细胞内阿霉素蓄积和潴留减少.结论TSG101真核表达载体转染SGC7901后其耐药性明显增强,提示TSG101在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用.
关键词： 胃肿瘤 肿瘤易感基因101 基因转染:多药耐药性 -
肿瘤易感基因101在胃癌细胞中的表达及意义
目的探讨肿瘤易感基因101(TSG101)在不同胃癌细胞系中的表达及其意义. 方法采用巢式RT-PCR、DNA重组技术和Western blot 等方法从mRNA 和蛋白水平检测TSG101的表达.结果在7株胃癌细胞系中均有野生型TSG101表达,经测序分析无基因突变;此外,尚存在1个288 bp的剪接变异体;在胃癌细胞系MKN45、SGC7901及其耐药亚系SGC7901/VCR和SGC7901/ADR中,还发现1个874 bp的剪接变异体;并发现野生型TSG101在SGC7901/VCR 和SGC7901/ADR中的表达较亲本细胞SGC7901增高. 结论 TSG101及其剪接变异体的表达在胃癌细胞系中常见,野生型TSG101可能参与了胃癌多药耐药的发生.
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TSG101和EGFR在胃癌组织中的表达及意义
目的:探讨肿瘤易感基因101(TSG101)及表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化方法检测42例胃癌及对应癌旁组织中的TSG101及EGFR蛋白的表达情况.结果:TSG101在胃癌组织中的表达低于癌旁组织(χ2=12.22,P＜0.05),而EGFR在癌组织中表达高于癌旁组织(χ2=10.16,P＜0.05).结论:胃癌的发生发展可能与TSG101的低表达及EGFR的高表达相关.
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TSG101在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖影响的相关研究
目的 探索肿瘤易感基因101(TSG101)调控肝癌细胞增殖的分子机制.方法 在HepG2和SMMC-7721细胞中构建TSG101沉默细胞系及瞬时转染外源TSG101;利用Western blot和免疫组化实验分析TSG101在肝癌中的表达,并通过Western blot分析TSG101影响肝癌细胞增殖的分子机制;利用EdU、细胞集落、CCK-8实验,分析TSG101对肝癌细胞增殖的影响.结果 TSG101在肝癌中表达增高;TSG101能够促进肝癌细胞的增殖;TSG101能够负调控p53.结论 TSG101是一种促癌因子,可以通过负调控p53促进肝癌细胞的增殖.
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胃癌中TSG101、 RUNX3的表达与幽门螺杆菌L型感染的关系
目的 探讨胃癌组织中肿瘤易感基因101 (TSG101)及人类Runt相关转录因子3(RUNX3)的表达与幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染之间的相互关系及临床意义.方法 收集胃癌组织样本89份,并随机选取35份对应癌旁组织为对照组.应用免疫组化方法检测上述组织中TSG101、RUNX3的表达及Hp-L型的感染情况.结果 胃癌组织TSG101、RUNX3的表达率分别为62.9％(56/89)、30.3％(27/89),Hp-L型感染率为72.0％(64/89),与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌Hp-L型阳性组中TSG101的表达高于Hp-L型阴性组,RUNX3表达低于Hp-L型阴性组.胃癌组织中TSG101的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移均有关(均P＜0.05),RUNX3的表达则与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及病理分期均有关(均P＜ 0.05).结论 TSG101在胃癌组织中呈高表达,RUNX3呈低表达;Hp-L型可通过调控TSG101及RUNX3的表达参与胃癌的发生发展.
关键词： 胃肿瘤 癌 肿瘤易感基因101 人类runt相关转录因子3 幽门螺杆菌L型 -
肿瘤易感基因101对肝癌细胞增殖侵袭转移的影响
目的 观察肿瘤易感基因101(TSG101)对肝癌细胞的增殖、侵袭、转移的影响.方法 建立稳定表达TSG101的肝癌细胞株,将细胞分为转染组、空质粒组、空白对照组,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验观察各组细胞增殖;通过Transwell小室侵袭实验观察各组细胞侵袭能力;通过Transwell小室迁移实验观察各组细胞转移能力.结果 (1)CCK-8增殖实验可见TSG101组36 h后细胞增殖比例(1.93±0.45)明显高于空白对照组(1.28±0.51)与空质粒组(1.31±0.29),且差异有统计学意义(P＜0.05);空白对照组与空质粒组比较差异无统计学意义(P＞0.05);(2)Transwell小室细胞侵袭实验:TSG101组[(125.0±10.3)个]细胞穿透个数明显高于空白对照组[(83.0±8.7)个]与空质粒组[(85.0±9.2)个],且差异有统计学意义(P＜0.05);空白对照组与空质粒组比较差异无统计学意义(P＞0.05);(3) Transwell小室细胞迁移实验:TSG101组[(88.0±7.0)个]穿透细胞个数高于空白对照组[(59.0±6.8)个]与空质粒组[(53.0±7.7)个],且差异有统计学意义(P＜0.05);空白对照组与空质粒组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高表达TSG101蛋白的肝癌细胞增殖、侵袭、转移能力均增强.
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肿瘤易感基因101对胃癌细胞血管形成的影响
目的 观察肿瘤易感基因101(TSG101)对胃癌细胞血管形成的影响.方法 对不同TSG101表达水平的3组胃癌细胞亚系,分别进行体内实验和体外实验,检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)的表达及血管形成.结果 (1)体外实验:TSG101组细胞促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)成管数目明显多于空质粒组与未转染组[(19.50±3.02)个比(11.50±2.51)、(11.34±1.63)个,P＜0.05],TSG101组细胞VEGF分泌水平高于空质粒组与未转染组[(514.80±18.16) ng/L比(306.58±20.86)、(305.69±29.93) ng/L,P＜0.05];(2)体内实验:TSG101组荷瘤裸鼠瘤组织微血管密度和血清VEGF水平均明显高于空质粒组与未转染组[11.16±2.31比5.33±1.63、4.66±1.36,(340.64±19.15) ng/L比(219.34±13.56)、(206.10±25.85) ng/L,P＜0.05].TSG101组荷瘤裸鼠瘤组织中VEGF、VEGFR表达(0.548 ±0.032、0.345±0.042)明显高于未转染组(0.350±0.034、0.203±0.030)与空质粒组(0.327±0.020、0.206±0.036,P＜ 0.05).结论 TSG101高表达的SGC7901细胞可能通过上调VEGF的表达促进胃癌血管形成.
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慢病毒介导shRNA沉默LAMP-2A和TSG101表达对PC12细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)降解的影响
目的 采用慢病毒介导的shRNA干扰技术,下调PC12细胞中溶酶体相关膜蛋白-2A(lysosome-associated membrane protein type 2A,LAMP-2A)和肿瘤易感基因101 (tumor susceptibility gene 101,TSG101)的表达,并研究其对EGFP-α-synuclein(A53T)降解的影响.方法 以LAMP-2A和TSG101为靶基因,合成寡核苷酸,退火形成双链DNA,与经BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切的pHBLV-U6-Puro 载体连接获得重组慢病毒载体;将其与病毒包装辅助质粒共感染293T细胞,收集并浓缩上清液获得重组病毒,测定病毒滴度;病毒颗粒转染PC12细胞,经嘌呤酶素筛选获得稳定感染细胞株;Western blot检测LAMP-2A和TSG101蛋白的表达;分别采用LAMP-2A shRNA2和TSG101 shRNA1下调PC12细胞中LAMP-2A和TSG101蛋白的表达,并结合巴佛洛霉素A1处理,研究其对PC12细胞中EGFP-α-synuclein (A53T)、EGFP、α-synuclein (A53T)和LC3B蛋白的影响,免疫荧光检测各组PC12细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)和LC3B蛋白的表达.结果 成功构建干扰LAMP-2A和TSG101表达的慢病毒载体,并在293T细胞中包装获得病毒.重组病毒感染PC12细胞后,Western blot检测结果显示LAMP-2AshRNA2和TSG101 shRNA1干扰效果好;下调LAMP-2A和TSG101蛋白表达均能够抑制细胞中EGFP-α-synuclein(A53T)、EGFP和α-synuclein(A53T)蛋白的降解(P＜0.01),并提高LC3-Ⅱ蛋白的含量(P＜0.01).结论 慢病毒介导的shRNA能有效地沉默PC12细胞中LAMP-2A和TSG101的表达,抑制细胞中EGFP-α-synuclein (A53T)的降解.
关键词： 溶酶体相关膜蛋白-2A 肿瘤易感基因101 慢病毒 α-突触蛋白 PC12细胞 -
下调TSG101对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的影响
目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的下调对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的影响.方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞中.分别使用MTT法、流式细胞仪检测siRNA干扰后MDA-MB-435S细胞增殖能力、细胞周期的变化.结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞与对照组相比,增殖能力减弱.细胞周期结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞周期与对照组相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少,细胞周期阻滞于G1/S期.结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的增殖,并导致细胞周期阻滞.TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程.
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下调TSG101基因对人结肠癌细胞LOVO生长的调节作用
目的:探讨TSG101基因对人结肠癌细胞生长的调节作用.方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入LOVO细胞,获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和western blot进行鉴定;MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化;Western blot检测细胞转染前后细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK6、p21和p27的表达变化.结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体;筛选到稳定的TSG101低表达的结肠癌细胞模型;转染TSG101小干扰RNA后的细胞生长速度显著减慢,出现G1期阻滞,且Cyclin D1的表达明显降低,p21的表达明显增高.结论:下调TSG101基因能抑制结肠癌细胞生长,提示该基因可能具有临床应用前景.
