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Chelex-100法提取DNA用于差异甲基化基因座检测的研究
目的 通过对Chelex-100提取法提取的DNA用于酶切的研究,为差异甲基化在法医实际工作中的应用性研究提供一种快速提取酶切底物的方法.方法 HhaⅠ酶切基因组DNA,PCR扩增,2％琼脂糖凝胶电泳检测,254 nm紫外灯下观察.结果 Chelex-100提取法提取的杂合子样本DNA加酶组只观察到来自父源的等位基因片段,而未加酶组能够观察到来自父源和母源的等位基因片段.结论 Chelex-100提取法提取的DNA能够作为酶切底物应用于差异甲基化基因座的研究.
关键词： 差异甲基化 聚合酶链反应 Chelex-100 -
C21orf25片段在母胎间的甲基化差异及其临床价值
目的:阐明C21orf25片段在母胎间甲基化状态的差异,探讨其用于无创性产前诊断的价值.方法:收集388例孕妇血浆,其中126例同时提取外周血细胞及胎盘(或绒毛)组织DNA,采用甲基化敏感性限制性酶切联合荧光定量PCR( MSRE +PCR)技术,检测母胎间C21orf25基因、RASSF1A基因甲基化状态的差异,分析其影响因素,并分别以胎源性RASSF1A或SRY基因为参照位点,计算孕妇血浆中胎源性C21orf25与参照位点的浓度比,判断胎儿21号染色体数量.结果:C21off25及RASSF1A在胎盘或绒毛组织中均呈高甲基化状态,而在母体外周血细胞呈现低甲基化状态.C21orf25在母胎间的甲基化差异程度受孕周的影响,早孕期小于中、晚孕期(P=O.002,P＜0.01).采用MSRE+PCR技术对孕妇血浆中C21orf25、RASSF1A片段的检出率分别为100％和96.9％.计算184例正常妊娠孕妇血浆中胎源性C21orf25/RASSF1A比值,确定其95％的参考值范围为0.20 ～3.46,以此为标准判断71例胎儿21号染色体数量,其中67例二倍体妊娠的准确率为94.0％( 63/67),4例21三体综合征妊娠,2例C21orf25/RASSF1A比值高于参考区间上限而获得诊断.以SRY为参照位点,94例正常二倍体男胎妊娠中甲基化C21orf25/SRY比值为3.16±1.20,95％参考值范围为0.81 ～5.51,以此为标准判断35例男胎21号染色体数量,准确率为97.1％(34/35),2例21三体妊娠均获准确诊断.结论:高甲基化C21orf25基因可作为孕妇血浆中胎儿DNA的标志物,通过计算该位点与参照基因的浓度比值,有望进行唐氏综合征的无创性产前诊断.
