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细胞连接在慢性鼻窦炎中的表达及意义
目的 探讨3种细胞连接蛋白在不同类型慢性鼻窦炎中的表达情况及其对上皮屏障功能改变的意义.方法 共66例患者,其中慢性鼻窦炎伴息肉者30例,分为嗜酸性粒细胞性鼻息肉组(15例)、非嗜酸性粒细胞性鼻息肉组(15例),慢性鼻窦炎不伴息肉组15例,正常对照组为鼻中隔偏曲患者共15例.用免疫组织化学染色检测各组中紧密连接蛋白(zonular occludens-1,ZO-1)、黏附连接蛋白(E-cadherin)和桥粒连接蛋白(desmoglein-1,dsg-1)的表达情况.结果 ZO-1的表达中,嗜酸性粒细胞性鼻息肉组与正常对照组相比有明显下降(P<0.05).E-cadherin的表达中,鼻息肉组和慢性鼻窦炎不伴息肉组与对照组相比呈明显上调表达(P<0.05),而dsg-1呈明显下调表达(P<0.05),并且鼻息肉组dsg-1的表达与慢性鼻-鼻窦炎不伴息肉组相比也呈明显下调表达(P<0.05).结论 3种不同类型的细胞连接蛋白在慢性鼻-鼻窦炎中的表达均有不同程度的改变,说明连接蛋白表达的改变与上皮屏障功能的破坏可能在慢性鼻窦炎的发病机制中发挥重要的作用.
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慢性乙醇摄取对急性肺损伤大鼠气道上皮细胞间连接蛋白occludin和E-cadherin及屏障功能的影响
目的 观察慢性乙醇摄取及内毒素处理对大鼠气道上皮屏障功能及紧密连接(TJ)特征性蛋白occludin和黏附连接(AJ)蛋白E-cadherin的影响.方法 将40只SD大鼠随机均分为对照组、慢性乙醇摄取组(乙醇组)、内毒素处理组(LPS组)、慢性乙醇摄取合并内毒素处理组(乙醇+LPS组).利用荧光示踪剂异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FD4)测定支气管肺泡上皮的通透性;免疫荧光共聚焦显微镜下观察大鼠气道上皮occludin和E-cadherin蛋白分布及表达;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织中occludin和E-cadherin的蛋白及mRNA表达;并观察肺组织病理学改变.结果 乙醇组及LPS组支气管肺泡上皮通透性均较对照组明显增高(P均＜0.05);乙醇+LPS组支气管肺泡上皮的通透性进一步增高(P＜0.01).occludin和E-cadherin蛋白在对照组大鼠气道上皮呈连续、均匀的胞膜及胞质中表达;在乙醇组、LPS组胞膜呈部分断裂、不连续的表达,且胞膜和胞质的表达下降;在乙醇+LPS组的表达显著下降,且胞膜表达呈明显的断裂甚至消失.Western blotting和RT-PCR显示,乙醇组和LPS组肺组织中occludin和E-cadherin的蛋白及mRNA表达均较对照组明显下降(P均＜0.05);乙醇+LPS组中蛋白及mRNA表达下降为明显,与其余各组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 慢性乙醇摄取通过降低TJ蛋白occludin和AJ蛋白E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平,并干扰各蛋白在胞膜上的定位,终导致气道上皮屏障功能受损,加重内毒素诱导的急性肺损伤.
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去乙酰化酶Sirt3沉默对缺氧条件下肠上皮Caco-2细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响及其对肠上皮屏障功能的作用
目的 采用RNA干扰(RNAi)技术,使去乙酰化酶Sirt3基因表达下调或缺失,观察其下调或缺失后对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及其对肠屏障功能的作用.方法 体外培养Caco-2细胞,分别检测跨上皮电阻(TER),常氧和低氧(1％O2)条件下Sirt3-小干扰RNA(siRNA)转染前后HIF-1α和紧密连接蛋白:ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA与蛋白表达.结果 常氧与低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Sirt3的蛋白表达分别下降52％、35％;HIF-1α的蛋白表达(0.72±0.01、0.93 ±0.01)比转染前(0.38 ±0.01、0.81±0.03)明显升高(P＜0.01);低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Occludin、Claudin-1、ZO-1的蛋白(0.71 ±0.03、0.69±0.01、0.72±0.02)和mRNA (0.80±0.01、0.84±0.01、0.88 0.03)表达比转染前明显降低(P＜0.01);低氧条件下,经Sirt3-siRNA转染后TER下降30.8％.结论 缺氧条件下,Sirt3可以调控HIF-1α的表达.沉默Sirt3后紧密连接蛋白表达降低,从而影响肠屏障功能.
关键词： 上皮屏障功能 RNA干扰 去乙酰化酶Sirt3 缺氧诱导因子-1 紧密连接蛋白 -
谷氨酰胺对急性肺损伤大鼠肺泡上皮屏障功能的影响
目的:观察谷氨酰胺时急性肺损伤大鼠肺泡上皮屏障功能及紧密连接(TJ)特征性蛋白occludin和黏附连接蛋白E-cadhefin的影响.方法:40只SD大鼠随机分为对照组、谷氨酰胺处理组(Gln组)、内毒素处理组(LPS组)、谷氨酰胺并内毒素处理组(Gln+LPS组).测定支气管肺泡渗透性、运用免疫印迹测定和RT-PCR测定肺泡Ⅱ型上皮细胞中occludin和E-cadherin的蛋白及mRNA表达.结果:内毒素导致支气管肺泡上皮渗透性明显增高2倍左右(JP<0.01);补充谷氨酰胺可以明显改善由内毒素处理引起的支气管肺泡上皮渗透性增高(P<0.05),但Gln+LPs组支气管肺泡渗透性仍较对照组及Gln组增高(P<0.05).免疫印迹和RT-PCR显示在LPS组的occludin和E-cadherin蛋白和mRNA表达水平均较对照组及Gln组的低(P<0.01);在Gln+LPS组中occludin和E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平较LPS组的高(P<0.05),而较对照组及Gln组的表达水平低(P<0.05).结论:实验提示内毒素通过降低TJ分子occludin和E-cadherin的mRNA、蛋白表达水平导致肺泡上皮屏障功能受损.补充谷氨酰胺通过上调其mRNA、蛋白表达水平而对肺泡上皮屏障功能有保护作用.
