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miR-144-3p靶向调控跨膜蛋白16A基因抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭实验
目的 阐明骨肉瘤143B细胞中miR-144-3p与跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)的表达关系,明确miR-144-3p与143B细胞增殖和侵袭的关系.方法 预测miR-144-3p和TMEM16A基因的互补配对关系,转染miR-144-3p模拟物后,Real-time PCR检测各组癌细胞中miR-144-3p和TMEM16A mRNA的相对表达水平,Western blot检测各组癌细胞中TMEM16A蛋白的相对表达,MTT法检测各组癌细胞的增殖,Transwell检测各组癌细胞体外的侵袭情况.结果 TargetScan和miRanda均显示miR-144-3p与TMEM16A基因互补配对较好.Real-time PCR和Western blot检测结果 表明miR-144-3p的过表达能够降低TMEM16A mRNA和蛋白的相对表达水平.MTT法和Transwell实验发现miR-144-3p的过表达能够抑制143B细胞的增殖和侵袭.结论 miR-144-3p通过下调骨肉瘤143B细胞中TMEM16A的表达水平进而抑制癌细胞的增殖和侵袭.
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miR-590-5 p靶向调控STAT3基因对骨肉瘤143 B细胞迁移和侵袭的影响
目的:探讨miR-590-5p和信号转导与转录激活因子3(STAT3)基因在骨肉瘤143B细胞中的表达,探讨miR-590-5p对STAT3基因的靶向作用及其对143B细胞迁移和侵袭的影响.方法:运用生物信息学方法对miR-590-5p和STAT3基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-590-5p模拟物以及干扰STAT3的siRNA后,real-time PCR检测miR-590-5p和STAT3 mRNA在癌细胞中的表达,Western blotting检测STAT3蛋白在癌细胞中的表达,细胞划痕实验检测癌细胞的迁移情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性.结果:生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-590-5p和STAT3基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-590-5p能够抑制STAT3 mRNA表达.Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-590-5p能够降低STAT3 mRNA和蛋白的表达.细胞划痕实验和Transwell实验发现过表达miR-590-5p能够分别抑制143B细胞的迁移和侵袭.结论:miR-590-5p通过负性靶向调控骨肉瘤143B细胞中STAT3基因的表达,进而抑制癌细胞的迁移和侵袭.
关键词： 骨肿瘤 微小RNA 信号转导与转录激活因子3 骨肉瘤143B细胞
