首页 > 文献资料
-
葛根素调控骨代谢的体外实验研究
目的:探讨中药葛根对骨形成和骨吸收的调控作用.方法:鼠颅盖骨机械法体外分离培养获得成骨细胞(osteoblast, OB);新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞(osteoclast, OC).实验组培养液为10%(体积分数)胎牛血清+αMEM培养液+不同(质量)浓度的葛根素,对照组不加葛根素.分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)和碱性磷酸酶(ALP)法检测OB的增殖和分化状态;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察OC形态变化,图像分析体外骨吸收陷窝面积,原子分光光度计法测定OC培养液上清液中Ca2+含量.结果:中药葛根素对大鼠OB的增殖无明显的刺激作用,但能够促进OB合成分泌ALP.同时,造成体外培养的OC空泡性变,骨吸收陷窝面积减少和培养液上清液中Ca2+含量的下降.结论:葛根通过抑制骨吸收,刺激骨形成来调控骨代谢,其中抑制骨吸收的效果较强.
-
转化生长因子β1在下颌骨牵引成骨过程中的作用
目的: 研究TGF-β1在不同时期下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化,探讨其可能发挥的作用.方法:恒河猴16只,10只行单侧下颌骨牵引,6只行双侧下颌骨牵引,采用下颌角部骨截开术,5 d间歇期后以每天0.5 mm×2次的速度牵引,共15 d.分别于牵引完成时、牵引后2、4、6、12周时处死一组动物.将牵引区骨块制作脱钙石蜡切片,进行HE染色及TGF-β1免疫组化染色.结果:牵引完成后早期阶段,TGF-β1阳性着色颗粒广泛分布于牵引区的纤维血管基质、成骨细胞及成软骨细胞中,尤其是在截骨断端的血肿区,TGF-β1的阳性着色强.在稳定期,牵引区TGF-β1的阳性着色逐渐减弱,主要见于胶原纤维矿化、成骨细胞形成类骨质的区域,且主要位于血小板、血管内皮细胞及成骨细胞胞浆中.牵引完成后12周,除骨髓腔中纤维血管基质可见少量TGF-β1的阳性着色颗粒外,在骨外膜、骨基质及骨细胞内已见不到明显的TGF-β1的阳性着色. 结论:TGF-β1活跃参与了牵引区新骨的形成过程,它在刺激和诱导骨前体细胞及原始间充质细胞增殖分化,促进牵引区成骨细胞及血管内皮细胞增生方面可能发挥了重要作用.
-
成人骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞
目的: 建立成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养的方法,并探讨定向诱导分化为成骨细胞的途径. 方法: 抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C,培养15 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,钙-钴法染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达,免疫组化(SABC法)检测Ⅰ型胶原、骨钙素表达,茜素红染色检测钙结节形成. 结果: Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;诱导分化的MSCs呈典型的成骨细胞形态;ALP染色阳性率可达81%以上;Ⅰ型胶原、骨钙素表达阳性;茜素红染色见钙结节形成. 结论: 可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为成骨细胞,可用作临床骨组织工程种子细胞.
