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卵巢癌抗独特型抗体/hGM-CSF融合蛋白质对体外免疫细胞的刺激作用
目的:探讨卵巢癌抗独特型单链抗体6B11 scFv/hGM-CSF融合蛋白质(6B11 GM)作为肿瘤疫苗的可能性.方法:采用体外T细胞增殖试验,对6B11 GM刺激T细胞的能力进行测定,并用流式细胞仪对T细胞表型及APC MHC Ⅱ表达情况进行测定,测定了外周血单个核细胞经6B11 GM激活后对卵巢癌细胞系的非MHC限制的杀伤活性.结果:6B11 GM及6B11均能引起特异的T细胞增殖,但6B11 GM组的增殖明显高于6B11组,以CD4+增殖为主.6B11 GM能明显增加抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC)的MHCⅡ表达,使APC更有效地摄取抗原,激活非MHC限制的杀伤活性.结论:6B11 GM能引起细胞免疫反应,作为疫苗具有良好的前景.
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抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究
目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性.方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较.结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3.在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%.Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK.在25～100 μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05).结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性.
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益赛普治疗幼年型类风湿关节炎的临床疗效及对血清TNFα和IL-1β的影响
目的 探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体C抗体融合蛋白(益赛普)治疗幼年型类风湿关节炎的临床疗效以及对血清肿瘤坏死因子α(TNFα)及白介素1β(IL-1β)的影响.方法 幼年型类风湿关节炎患者12例,女性11例,男性1例,使用益赛普治疗,12.5 mg,皮下注射,每周2次,治疗8周,观察患者关节疼痛、肿胀、晨僵时间、握力、患者总体评估、医生评分等临床症状的改善情况,并检测血沉、C反应蛋白(CRP)、血清TNFα及IL-1β的浓度.结果 益赛普起效迅速,所有的患者在第2周达到了临床缓解ACR20.治疗8周,50%(6/12)的患者获得了ACR70缓解,血清TNFα及IL-1β的浓度显著下降(P＜0.05).结论 益赛普治疗幼年型类风湿关节炎短期疗效非常明显,能作为治疗难治性幼年型类风湿关节炎诱导缓解的首选药物,其长期疗效以及安全性有待进一步观察.
