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以白色念珠菌为模型高通量筛选潜在抗真菌药物
目的通过高通量药物筛选来寻找有活性的广谱性抗真菌药物,专一性抗白色念珠菌药物以及特异性抑制含核酶的白色念珠菌生长的药物.方法以两株基因型不同的白色念珠菌菌株(一株含Ⅰ型内含子核酶,一株不含核酶)和一株非病原真菌啤酒酵母(不含Ⅰ型内含子核酶)为细胞模型,3种菌株依次以96孔板为容器,在起始菌液浓度的A580nm为0.1时分别加入10720种药物样品(包含化合物与天然产物),在30℃静止培养6 h,选取抑菌效率超过50%的样品进行复筛.结果通过初筛和复筛,发现了23种药物在10 μg·mL-1的浓度时的抑菌效率超过50%,其中1种药物特异性抑制含核酶的白色念珠菌生长,是潜在的抗核酶药物;4种药物特异抑制白色念珠菌的生长,是潜在的抗白色念珠菌药物;18种药物抑制所有模式菌株的生长,是潜在的广谱性抗真菌药物.结论本研究在国内首次采用自动化工作站进行抗真菌药物的高通量药物筛选,方法简便快捷,筛选结果稳定可靠,并筛选到一些有希望向临床发展的抗真菌药物活性样品.此方法有可能应用于抗其他病原微生物的药物筛选.
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Ⅰ型内含子核酶的研究进展
核酶具有特异识别和切割靶RNA的特点,从而可以抑制一些特异基因产物的表达,而Ⅰ型内含子核酶,不但具有剪切功能,而且可以进行顺式剪接及反式剪接.随着人们对Ⅰ型内含子核酶的功能结构也有了进一步认识,相继用Ⅰ型内含子核酶对p53突变mRNA及镰形红细胞贫血等遗传性疾病致病基因mRNA的修复做了大量的研究,并取得了一定的成果.
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定点诱变自我剪接Ⅰ型内含子核酶
目的验证嗜热四膜虫核酶自我剪接功能,定点诱变Ⅰ型内含子核酶及检测其自我剪接功能.方法PCR扩增嗜热四膜虫核酶基因连入pGEM-T载体,通过重组PCR获得3个非发夹区域定点诱变的Ⅰ型内含子核酶基因,连入pG-EM-T载体,分别进行体外转录.结果嗜热四膜虫核酶及诱变的3个核酶自我剪接功能完全.结论非发夹区诱变的核酶不改变其自我剪接的功能,为以后反式剪接核酶的设计构建提供了更多的选择基础.
