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依替米星有关物质的9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生化高效液相色谱法检查与液质联用鉴定
目的 采用9-芴甲氧羰酰氯(Fmoc-Cl)为柱前衍生化试剂,建立了Fmoc-Cl柱前衍生化反相高效液相色谱法用于检查并鉴定硫酸依替米星的有关物质.方法 采用Lichrospher-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％的甲酸溶液,等度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长265 nm,并采用电喷雾正离子化监测的LC-TOF/MS和LC-MS/MS鉴定主要有关物质.结果 该法比现有文献报道方法灵敏度和准确性更好,衍生化反应完全,衍生物稳定,依替米星及其有关物质衍生物色谱分离度良好,共测得并鉴定了硫酸依替米星中的25个有关物质,其中8个为第一次报道.结论 方法专属性高、准确度和耐用性好,适用于硫酸依替米星的含量测定及有关物质检测.
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庆大霉素C1a生产过程中不同样品的HPLC法检测
参照美国药典USP37-NF32版,采用柱前衍生化-HPLC法测定庆大霉素C1a(1)对照品及生产阶段的不同样品.在检测经离子交换树脂HZ-732富集后的洗脱液样品B时出现1个新的杂质峰,且检测所得1的浓度明显偏低.经LC-MS分析,推测该杂质为邻苯二甲醛(OPA)不足的情况下1与巯基乙酸在碱性条件下的结合产物.经方法优化,通过稀释样品、增加衍生化试剂量及增加衍生化试剂中OPA的量,均可准确检测不同样品中1的浓度和纯度.向衍生化试剂中增加OPA,更适用于1发酵生产过程中不同阶段样品的检测.
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用HPLC-ESI-IT-MSn法研究庆大霉素C1a的杂质谱
目的:建立用于研究庆大霉素C1a杂质谱的HPLC-ESI-IT-MSn方法,并对检出杂质结构进行快速推定.方法:用宽pH范围的Gemini NX C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以[水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)]-甲醇(85∶15)为流动相,用ESI-IT-MSn检测(质谱条件:ESI离子源,离子源温度350℃,雾化室压力275.8 kPa,干燥气流速10L·min-1,正离子检测方式).结果:该色谱条件能将庆大霉素C1a与主要杂质分离,从庆大霉素C1a原料中检出13个杂质,对其中12个的结构进行了归属.通过与杂质对照品的色谱保留时间,一、二级质谱比较,对已知杂质进行了鉴定;借助总结出来的氨基糖苷类抗生素的特征裂解碎片离子和质谱裂解规律,根据一级、二级质谱或多级质谱信息,对无杂质对照品的未知杂质结构进行推导,结果显示,庆大霉素C1a样品中含有庆大霉素A、庆大霉素B、西索米星、小诺霉素、威达米星或它们的同分异构体和同系物,并含有庆大霉素C1a或上述杂质的降解产物.结论:该方法可以用于庆大霉素C1a的工艺优化和质量控制.
关键词： 庆大霉素C1a 杂质谱 高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱 结构推定 -
3″-N-脱甲基庆大霉素C1a的合成及结构测定
用碘和庆大霉素C1a反应,经分离纯化,得到3″-N-脱甲基庆大霉素C1a,可以作为结构修饰的前体.
关键词： 庆大霉素C1a 3″-N-脱甲基庆大霉素C1a 合成 结构测定 -
紫外分光光度法快速测定庆大霉素C1a含量在高通量筛选中的应用
目的 探索庆大霉素C1a含量的快速检测方法,实现诱变菌株的高通量筛选.方法 以紫外分光光度法作为检测庆大霉素C1a含量的手段,对庆大霉素C1a单组分生产菌株进行ARTP、LiCl、微波和ARTP+LiCl诱变,通过高通量筛选获得高产菌株,并在5L发酵罐中对高产稳定性菌株进行验证.结果 紫外分光光度法和高效液相色谱法对发酵液中庆大霉素C1a含量进行测定,大相对误差为3.98％;筛选获得了10株高产菌株,其中AL324菌株与出发菌株相比,摇瓶效价提高了52％;通过稳定性传代实验,获得了4株高产稳定性菌株.5L发酵罐验证实验表明AL324与出发菌株相比效价提高了81.3％.结论 紫外分光光度法可以快速检测发酵液中庆大霉素C1a含量,该方法应用于高通量筛选中,获得了高产菌株,筛选结果表明ARTP+LiCl复合诱变方法的正突变率较高,是一种有效的庆大霉素C1a高产菌株诱变方式.
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HPLC-PAD法测定硫酸依替米星氯化钠注射液中有关物质
目的:建立硫酸依替米星氯化钠注射液有关物质的反相高效液相色谱-脉冲安培电化学(HPLC-PAD)检测方法.方法:采用Welch Ultimate LP-C18(4.6 mm ×300 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,以0.2 mol·L-1三氟乙酸(用50％氢氧化钠溶液调pH至2.0)-乙腈(92∶8)为流动相,流速1.0 mL· min-1,柱后碱溶液为0.5 mol·L-1氢氧化钠溶液,流速0.5 mL·min-1,检测器为脉冲安培电化学检测器,工作电极为金电极(3 mm直径).结果:依替米星在0.3～30 μg·mL-1(r=0.9985)内线性关系良好;单个大杂质的重复性试验的RSD(n=6)为0.8％,总杂质的重复性试验的RSD(n =6)为1.3％;方法的检测限(S/N=3)为2.5 ng,定量限(S/N=10)为7.5 ng;供试品溶液在12 h内稳定性良好.结论:该方法经方法学验证,可以用于硫酸依替米星氯化钠注射液有关物质的测定.
