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H7K(R2)2修饰的pH敏感脂质体对U87-MG细胞的靶向作用
为了探讨H7K(R2)2修饰的pH敏感脂质体对U87-MG细胞的靶向作用,本文选择香豆素-6(coumarin-6)为荧光探针构建了包载香豆素-6的H7K(R2)2修饰的pH敏感脂质体(coumarin-6-PSL-H7K(R2)2).采用流式实验分别对H7K(R2)2在coumarin-6-PSL-H7K(R2)2中的比例以及coumarin-6-PSL-H7K(R2)2在U87-MG细胞的摄取途径进行研究.采用CD技术对H7K(R2)2在pH 7.4和pH 6.8条件下的二级结构进行考察.实验结果显示,H7K(R2)2在coumarin-6-PSL-H7K(R2)2中占2.5％时,其靶向作用优于1％和3.5％.细胞摄取途径实验表明,coumarin-6-PSL-H7K(R2)2进入U87-MG细胞不受菲律平、甲基-β-CD和氯丙嗪等抑制剂的影响.H7K(R2)2在pH 6.8时的二级结构多为β-turn.本研究结果表明,在H7K(R2)2修饰的pH敏感脂质体中,H7K(R2)2的佳比例可确定为2.5％.H7K(R2)2修饰的pH敏感脂质体进入肿瘤细胞的途径主要通过低pH条件下H7K(R2)2所产生的穿膜肽样作用.H7K(R2)2在pH 6.8条件下所出现的发卡样二级结构是其产生靶向和穿透作用的可能机制.
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人U87-MG脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立
目的 应用不同数量U87-MG细胞接种裸鼠脑内,建立裸鼠脑胶质瘤模型,观察其生长特性.方法 采用立体定向技术,分别将3.0×1010·L-1、4.0×1010·L-1、5.0×1010 ·L-1浓度的人脑胶质瘤细胞U87-MG单细胞悬液,接种于18只♂裸鼠的右侧尾状核区,每只接种体积为5 μL,另取6只裸鼠作为对照,接种同体积Hanks液.观察不同接种量实验鼠的生存状态、成瘤情况及脏器转移灶、带瘤生存期,测量肿瘤的大径,计算肿瘤体积,将获取的全脑标本制作病理切片,行HE染色和免疫组化检查.结果 各接种量的实验组成瘤率均为100%,未见颅外转移病灶,3组裸鼠的平均生存时间分别为(46.50 ± 3.27) d、(38.50 ± 3.28) d、(30.67 ± 3.51) d;病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征和免疫表型;免疫组化GFAP和S-100蛋白呈阳性表达.结论 立体定向脑内定量注射U87-MG细胞制备的人脑胶质瘤裸鼠原位移植模型成瘤率高、颅内生长稳定、颅外远隔部位转移率低,与人脑胶质瘤病理学及形态学特征相似,能为研究胶质瘤的发生、发病机制、生物学特性以及探寻有效的治疗措施提供可靠的动物模型.
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TRPV2基因敲除对胶质瘤U87MG细胞增殖能力的影响
目的:探讨瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚族2 (TRPV2)基因敲除对胶质瘤U87MG细胞增殖及细胞周期进展的影响.方法:通过锌指核酶敲除U87MG细胞的TRPV2基因；Western Blot测定TRPV2蛋白的表达；Brdu掺入实验及Western Blot测定TRPV2基因敲除对U87MG细胞增殖的影响；流式细胞技术测定TRPV2基因敲除对U87MG细胞细胞周期进展的影响.结果:TRPV2蛋白在U87MG细胞中转录表达；靶向TRPV2的锌指核酶能有效地阻断U87MG细胞内TRPV2基因在蛋白水平上的表达.TRV2-/-U87MG细胞Brdu阳性率为(47.37±4.03)％,处于S期细胞的百分率为(20.14±0.47)％,均显著高于TRV2-/-U87MG细胞(P＜0.01)；PCNA表达量为U87MG TRV2+/+细胞的(1.47±0.19)倍(P＜0.01).结论:TRPV2基因敲除能明显促进U87MG细胞的增殖和细胞周期的进展.
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miR-370-3p对胶质母细胞瘤U87-MG细胞株增殖能力的影响
目的 探讨微小RNA-370-3p(miR-370-3p)对人脑胶质瘤细胞系U87-MG增殖能力的影响及其机制.方法 将常规培养的U87-MG细胞分为空白组、无义序列转染组和模拟物转染组,后两组分别转染miRNA无义序列及miR-370-3p模拟物,qRT-PCR法检测其转染效率,免疫印迹法检测转染细胞叉头框蛋白M1(FoxM1)的表达;采用EdU法评估细胞的增殖能力,采用平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果 与空白组和无义序列转染组比较,模拟物转染组细胞miR-370-3p表达显著增加(P＜0.05),而FoxM1的蛋白表达显著减少(P＜0.05);而且模拟物转染组U87-MG细胞增殖能力及克隆形成率均明显减少(P＜0.05).结论 miR-370-3p能够抑制U87-MG细胞的增殖能力,可能与减少FoxM1的表达有关.
