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蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究
目的：：研究蛋氨酸脑啡肽（Met-ENK）对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法：采用MTT法检测细胞生长抑制率；流式细胞术检测Met-ENK作用后肿瘤细胞周期变化；Real-time PCR法检测Met-ENK作用后细胞内P21，P53基因转录量变化；Western blot法检测细胞内P21，P16，磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果：MTT法结果显示，Met-ENK对SH-SY5Y细胞有生长抑制作用，在Met-ENK浓度为10-5 mol· L-1时抑制率为40%；流式细胞术证实Met-ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0/G1期，该期细胞数由63.97%变为87.73%；P21的基因转录量是用药前的3倍，P53基因转录量是用药前的5倍；P21，P16蛋白表达量明显增加，磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论：Met-ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子P21及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量，下调Rb蛋白的磷酸化水平将SH-SY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0/G1期，表明Met-ENK的G0/G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。
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Ki-67、FHIT、c-myc、nm23-H1与肿瘤的研究进展
肿瘤的发生是一个多基因、多因素参与的过程,原癌基因的异常和结构改变以及抑癌基因的失活与突变,可导致细胞癌变.肿瘤增殖抗原Ki-67可反映肿瘤细胞的增殖活性,从而判断肿瘤的恶性程度.c-myc是作为促进细胞分裂的基因和决定细胞从G0/G1期进入S期的"开关",其编码的蛋白介导细胞外的生物信号向细胞核内传递,与细胞增殖分化及癌变有密切关系.
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地西他滨对同步化的G0／G1期MDS-L细胞系线粒体功能的影响
目的：初步探讨地西他滨（ DAC）在不整合入基因组DNA的情况下对线粒体生物学功能的影响。方法采用阿非迪霉素（ APC）将MDS-L细胞同步化在G0/G1期。 DCFH-DA检测不同浓度DAC（0、5、10、15μmol/L）处理后的同步化G0/G1期细胞系活性氧（ ROS）的产生水平。采用qRT-PCR法检测线粒体DNA拷贝数和线粒体编码基因NADH脱氢酶1、6（ ND1、ND6） mRNA改变。结果与对照组相比，DAC在低浓度5μmol/L条件下可以通过不依赖DNA损伤的途径增加细胞ROS的产生（P＜0．05），同时细胞内线粒体DNA（MtDNA）的拷贝数较对照组明显增加，差异有统计学意义（P＜0．05）。但随着DAC浓度增加，DAC在高浓度（15μmol/L）可降低ROS的产生（P＜0．05）。此外，在高浓度DAC作用下，ND1和ND6基因表达较对照组明显升高（P＜0．05）。结论 DAC通过影响细胞ROS产生，改变线粒体DNA的拷贝数以及调控线粒体基因的表达，产生对线粒体功能的影响，并呈浓度依赖性。
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蛋氨酸脑啡肽对MCF-7/ADR生长抑制作用机制的初步研究
目的 研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对MCF-7/ADR肿瘤细胞的抑制作用的效果及机制的初步研究.方法 采用CCK-8法检测不同剂量的Met-ENK(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 mol/L)对乳腺癌细胞MCF-7/ADR作用48 h后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0、24、36、48及 72 h后的MCF-7/ADR的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48 h后,MCF-7/ADR细胞周期变化情况.结果 结果显示与空白对照组相比,Met-ENK对MCF-7/ADR细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间依赖性,但不呈剂量依赖性,10-6 mol/L浓度时,Met-ENK抑制肿瘤细胞生长效应强;在Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期.结论 Met-ENK对MCF-7/ADR肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期阻滞来发挥抑制肿瘤细胞生长的作用.但其机制仍需进一步研究及证实.
关键词： 蛋氨酸脑啡肽 MCF-7/ADR细胞株 G0/G1期 抑制作用 -
血清饥饿法对人牙髓细胞周期同步化的研究
目的:探讨不同的血清饥饿方法和饥饿时间对人牙髓细胞(HDPCs)细胞周期的影响.方法:血清直接饥饿和梯度饥饿处理人牙髓细胞.倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8检测血清饥饿处理对HDPCs增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期验证HDPCs同步化的效果.结果:血清直接饥饿处理或梯度饥饿处理后其G0/G1期HDPCs的比例均显著高于一般培养组(P<0.05),但血清直接饥饿组和梯度饥饿组间无显著性差异(P>0.05).用含5 mL/L FBS的DMEM培养基培养48 h能获得较满意的结果,G0/G1期细胞百分比达85.95%.结论:血清饥饿法能有效地使人牙髓细胞同步于G0/G1期;5 mL/L FBS血清饥饿处理细胞48 h可取得较好的细胞周期同步化效果.
