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肠道菌群介导溃疡性结肠炎大鼠肠CYP3A和P-糖蛋白的变化及机制
肠道细胞色素P450 3A (cytochrome P450 3A,CYP3A)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是肠屏障的重要组成部分.炎症性肠病中肠CYP3A和P-gp下调伴随肠道菌群紊乱.但两者是否关联？机制如何？尚不清楚.本研究采用5％葡聚糖硫酸钠诱导大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC),并对正常动物分别灌胃正常及UC动物粪便,发现粪便移植改变了受体动物肠道菌组成,而移植UC粪便组肠CYP3A2和P-gp mRNA的表达显著下调.外膜囊泡(outer-membrane vesicles,OMVs)是革兰阴性菌产生、进行群体行为及与环境通信的关键结构.不同处理组的OMVs均能下调人结肠腺癌细胞Caco-2中CYP3A4和P-gp的mRNA表达,而UC组以及UC粪便处理组的OMVs的抑制作用更强,且相对分子质量3～5万的OMVs组分的作用更显著.细胞经toll样受体4 (toll like receptor 4,TLR4)抑制剂瑞沙托维处理或转染TLR4 siRNA能够阻断OMVs对CYP3A4和P-gp的下调.本研究证实,UC肠道菌部分通过分泌OMVs活化TLR4受体通路下调肠道CYP3A和P-gp表达.
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3种方法 提取的B群脑膜炎奈瑟菌外膜囊泡组分的免疫原性、毒性及杀菌活性
目的 采用3种方法 提取B群脑膜炎奈瑟菌(Serogroup B Neisseria meningitidis,MenB)的外膜囊泡(Outer membrane vesicle,OMV),并分析其免疫原性、毒性和杀菌活性.方法 分别采用去污剂+EDTA、EDTA、从培养上清液中离心提取3种方法 获得MenB的OMV,即dOMV、nOMV和sOMV,SDS-PAGE分析OMV主要蛋白组分,Lowry法测定蛋白浓度,LAL试验测定内毒素含量.将3种OMV免疫小鼠,采用ELISA法测定小鼠血清中IgG抗体滴度,杀菌力试验测定3种OMV诱导针对MenB补体依赖的杀菌反应.结果 dOMV、nOMV和sOMV的主要蛋白成分基本一致,内毒素含量分别为5.0× 103、7.5× 104和4.0× 106EU/mg,产率分别为11.640、10.210和4.135 μg/10m个细菌；dOMV、nOMV和sOMV组小鼠血清抗体滴度分为3.98×106、2.51×107和5.62× 104,与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),杀菌抗体滴度分别为501.70、697.11和55.39.结论 用3种不同的方法 成功制备了3种MenB的OMV,并对其免疫原性、毒性和杀菌活性进行了比较,为研发B群脑膜炎OMV疫苗提供了理论依据.
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两种提取铜绿假单胞菌外膜囊泡的方法比较
目的 对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较.方法 分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blotting对OMV中所含ETA进行比较;建立OMV感染人肺癌上皮细胞A549模型并检测IL-8表达水平.结果 超滤浓缩法提取的OMV中存在明显的细胞碎片、鞭毛等杂质,产量为21.3 μg/1010个细菌,密度梯度离心提取的OMV无明显杂质存在,产量为48.7 μg/1010个细菌;相比于超滤浓缩法,密度梯度离心法提取的OMV中含有更高浓度的ETA且诱导A549细胞产生更高水平的IL-8.结论 Optiripe密度梯度离心法提取的PA的OMV的产量和纯度和ETA含量以及激活宿主细胞炎性应答的能量均高于超滤浓缩法.
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鲍曼不动杆菌外膜囊泡的提取、纯化及活性检测
目的 提取并纯化鲍曼不动杆菌(AB)标准株ATCC17978的外膜囊泡(omv),观察其形态、结构并检测其活性.方法 常规培养鲍曼标准株,Optiprep密度梯度超速离心提取并纯化其omv,经负染电镜检测omv形态;BCA法检测omv总蛋白浓度,SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量大小;用纯化的omv和蛋白酶K处理后的omv分别刺激人肺癌上皮细胞A549,同时用设不加omv的A549细胞做对照,酶链免疫吸附(ELISA)法检测炎性因子白细胞介素(IL)-8表达水平.结果 鲍曼不动杆菌分泌的omv为10～200 nm的球状囊泡结构;其合有的总蛋白浓度为43.2 mg/mL;ELISA结果提示,鲍曼不动杆菌分泌的omv可刺激A549细胞产生炎性因子IL-8,且产生水平与omv剂量呈正比.结论 纯化的鲍曼不动杆菌的omv为10～200 nm的双层囊泡结构,内含多种毒力蛋白,能刺激人肺癌上皮细胞A549产生IL-8.
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医院感染nosocomialis不动杆菌的研究进展
鲍曼不动杆菌、pittii不动杆菌和nosocomialis不动杆菌是近年来常出现的可引起严重人类疾病的医院获得感染条件致病菌,也是各医院中常被分离的不动杆菌.这3种不动杆菌表型相近,然而noso-comialis不动杆菌无论在临床价值、产碳青霉烯酶的耐药机制上,还是毒力研究方面均与鲍曼不动杆菌存在较多差异.本文就nosocomialis不动杆菌的鉴定方法、分子流行病学研究进展、临床预后、产碳青霉烯酶和相关毒力因子的研究现状作一综述.
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革兰阴性菌外膜囊泡的研究进展
外膜囊泡是由革兰阴性菌分泌产生,包含了多种生物分子,发挥重要生物功能,对于细菌的生存、定植、致病和细菌间及细菌与宿主间的细胞交流均有重大意义.本综述多方面地展示了外膜囊泡的合成与成分、作用与致病机制、提取方法和应用等各方面的研究进展.重点描述了其生物学功能.
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鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展
鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中常见的一种革兰阴性杆菌,同时也是医院获得性感染的主要致病菌之一.由于其广泛的耐药性,普通抗生素对其治疗效果已不明显.近年来,国内外学者尝试通过研制抗菌疫苗的手段来防治鲍曼不动杆菌感染,主要有灭活全菌体疫苗、外膜囊泡、重组蛋白亚单位疫苗、荚膜多糖候选疫苗、联合疫苗等.现就鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展进行了综述.
