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重组ORF50和ORF73融合抗原检测HHV-8病毒的探讨
目的 构建高效表达重组HHV-8病毒ORF50和ORF73融合蛋白原核表达载体,为诊断试剂国产化提供抗原.方法 设计并合成扩增ORF50和ORF73基因引物,以HHV-8感染血清DNA为模板,扩增出目的基因,连接基因片段,IPTG诱导表达重组融合蛋白.包被ELISA酶标板后对无偿献血人员血清进行检测,以市售HHV-8 ELISA试剂盒作对照.结果 与市售人疱疹病毒8型(HHV-8)ELISA试剂盒检测结果一致.结论 构建的原核表达载体可成功表达重组HHV-8病毒ORF50和ORF73融合抗原,该抗原可作为HHV-8感染检测的诊断抗原.
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HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定
目的：选用人巨细胞病毒( HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒，诱导其表达，纯化目的蛋白；并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列，设计合理引物；各基因片段用Overlap方法连接，并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点，使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株，经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化，获得目的蛋白，采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE )证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白，采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HC-MV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒，并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。 Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。
