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HSV-TK/GCV自杀基因系统联合γ射线放射治疗宫颈癌的实验研究
目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统协同60Co γ射线放射治疗对人宫颈癌细胞系的体内外联合杀伤作用,以及HSV-TK/GCV对放射治疗的增敏作用.方法分别以HSV-TK/GCV、60Coγ射线放射治疗及两者联合治疗人宫颈癌HeLa细胞系和裸鼠宫颈癌移植瘤模型,比较治疗效果;利用增敏效应比值(E/O)、克隆形成实验评价体内外HSV-TK/GCV对放射敏感性的影响.结果在体外实验中,自杀基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为45.8%,单纯放疗的抑制率为42.4%,而基因治疗与放疗联用的抑制率为87.5%,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01);且联合治疗组对射线敏感性较单独治疗组明显增加,克隆形成率明显下降(P＜0.05);在体内实验中,单纯基因治疗与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为39.5%和35.8%,而基因治疗放疗联用的抑瘤率达到87.9%,与前两者比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);增敏效应比值(E/O)为3.2(＞ 1.4),提示HSV-TK/GCV对放疗具有增敏作用.结论HSV-TK/GCV自杀基因系统具有放射增敏作用,二者联合治疗可作为宫颈癌综合治疗的有效补充方法.
关键词： 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 人宫颈癌 自杀基因治疗 放射治疗 -
HIFU联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶的超声微泡治疗对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响
目的 观察高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶(Herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)的超声微泡(Ultrasound microbubble)治疗对兔VX2肝移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及微血管密度(Microvascular density,MVD)的影响,并探讨其机制.方法 复制兔VX2肝移植瘤模型,建模4周后,将荷瘤兔随机分为4组:对照组(A组),HIFU组(B组),超声辐照载基因微泡组(C组)和HIFU联合超声辐照载基因微泡组(D组).治疗后两周观察肿瘤大小,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及MVD,Real-time PCR检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF基因mRNA的转录水平.结果 治疗后2周,B、C、D组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,基因mRNA转录水平,MVD及肿瘤体积均明显低于A组(P＜0.05),且D组明显低于B组和C组(P＜0.05).结论 HIFU联合包裹HSV-TK基因的超声微泡治疗可抑制肿瘤生长及肿瘤血管新生,降低残余瘤区HIF-1α和VEGF基因的表达,提高HIFU的疗效.
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表达HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建与鉴定
目的:构建含自杀基因(HSV-TK)的痘苗病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备.方法:利用目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切等多种基因工程技术将胶纯化回收的HSV-TK与pMJ601进行连接、转化及鉴定.结果:克隆在X-pPNT质粒上的HSV-TK DNA 成功地被克隆到经BamH Ⅰ-HindⅢ双酶切的pMJ601载体上.结论:重组HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建,为胃癌自杀基因的基因治疗打下坚实的基础.
关键词： 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 pMJ601 构建 -
重组单纯疱疹病毒-胸苷激酶和人白介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建
目的构建含单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)和人白介素-2(hIL-2)基因的痘苗病毒真核表达载体pWJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要的准备.方法利用目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、DNA序列分析等多种基因工程技术,将纯化回收的HSV-tk和hIL-2分别与pMJ601进行连接、转化并鉴定.结果分别用BamHⅠ-HindⅢ和SalⅠ-BmHⅠ酶切位点,将HSV-tk与hIL-2 DNA成功地克隆到pMJ601真核表达载体上.结论重组HSV-tk+hIL-2基因pMJ601的构建,为进一步研究胃癌的基因治疗打下坚实的基础.
关键词： 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 白介素-2 pMJ601 构建 -
逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗胰腺癌的实验研究
目的 探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus type I thymidine kinase gene,HSV-TK)基因治疗实验性人胰腺癌细胞系8988的价值.方法 HSV-TK被定向克隆入逆转录病毒载体pMNSM的SV40下游.重组逆转录病毒载体pMNS-TK-M转染至逆转录病毒包装细胞PA317细胞,产生的重组病毒将HSV-TK转入人胰腺癌细胞系8988细胞内.结果 Southern blot试验及药敏试验均证实HSV-TK基因已整合至细胞DNA中并完全表达.体外试验表明,HSV-TK阳性8988细胞对ACV的敏感性较母本细胞明显高;裸鼠移植瘤试验证实,腹腔注射ACV 100mg/kg有明显阻止移植瘤形成以及对移植瘤的治疗作用.结论 HSV-TK/ACV有体内治疗胰腺癌的作用,可作为胰腺癌基因治疗的潜在方法之一.
关键词： 胰腺癌 基因治疗 逆转录病毒 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 -
HSV-TK基因在膀胱癌的体内转移和GCV的治疗效果
[目的]探讨HSV-TK基因在膀胱癌动物体内的合适转移途径,观察HSV-TK/GCV系统的体内治疗效果.[方法]在T739同基因鼠膀胱癌皮下肿瘤模型中,以裸质粒DNA瘤内直接注射、脂质体包裹和逆转录病毒介导3种不同方法转移HyTK基因,观察GcV对膀胱癌的治疗效果.[结果]脂质体复合物组及逆转录病毒组背部肿瘤生长减慢,抑瘤率分别为54%、68%.动物平均存活时间分别比对照组延长28.81%、44.16%.[结论]脂质体、逆转录病毒介导的基因转移是膀胱癌基因治疗的有效手段.
关键词： 膀胱肿瘤 基因疗法 脂质体 逆转录病毒 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 -
pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合γ射线放疗鼻咽癌的体内实验
目的:探讨pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合γ射线放疗人鼻咽癌的杀伤效应.方法:分别以pAdKDR-tk/GCV、60Co γ射线放疗及两者联合治疗裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型,比较疗效;利用肿瘤生长曲线及肿瘤抑瘤率评价该自杀基因系统联合放疗的疗效.结果:单纯基因治疗与放疗对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为58.43%和70.88%,而基因治疗与放疗联合应用的抑瘤率达到84.39%,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01);第21天基因治疗与放疗联合治疗组肿瘤平均体积仅为对照组的13.5%,明显低于单纯基因治疗与放疗.结论:pAdKDR-tk/GCV自杀基因系统联合放疗的疗效较单一治疗方案有显著的提高,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮自杀基因联合放疗研究奠定了良好的理论和临床基础.
关键词： 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 鼻咽肿瘤 自杀基因治疗 放射治疗 -
HSV-TK自杀基因联合热疗杀伤肝癌细胞系的实验研究
目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合热疗(hy-perthermia)对人肝癌细胞系HepG2体外的杀伤作用.方法 采用脂质体转染法将HSV-TK基因转染HepG2细胞,观察GCV联合热疗对HepG2/tk的体外杀伤作用.结果 热疗与GCV联用组各温度作用下细胞凋亡率均较对照组和单用GCV组明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).随着温度的升高,热疗联合GCV组诱导细胞凋亡的效果也增强,44℃时细胞增殖抑制率为(78.8±7.5)%,细胞凋亡率达(42.8±3.6)%.结论 脂质体可介导HSV-TK基因转染入HepG2细胞并获得稳定表达,热疗可显著提高GCV对HepG2/tk细胞的杀伤效果.
关键词： 肝肿瘤/治疗 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 自杀基因治疗 热疗 -
HSV-TK基因在膀胱癌小鼠体内的转移和丙氧鸟苷治疗效果
目的探讨HSV-TK基因在膀胱癌动物体内的转移途径.观察HSV-TK/GCV(丙氧鸟苷)系统体内治疗的效果.方法在T739同基因鼠膀胱癌皮下肿瘤模型中,以裸质粒DNA瘤内直接注射、脂质体包裹和逆转录病毒介导等3种不同方法转移HyTK基因,观察丙氧鸟苷对膀胱癌的治疗效果.结果脂质体复合物组及逆转录病毒组背部肿瘤生长减慢,抑瘤率分别为54%、68%;动物平均存活时间分别比对照组延长28.81%、44.16%.结论脂质体、逆转录病毒介导的基因转移是膀胱癌基因治疗的有效手段.
关键词： 膀胱癌 基因治疗 脂质体 逆转录病毒 单纯疱疹病毒-胸苷激酶
