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壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的生物相容性研究
目的:评价比较不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(Chitosan/Calcium polyphosphate,CS/CPP)复合支架的细胞相容性和组织相容性,探讨其应用于组织工程半月板支架材料的可行性.方法:采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况.采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液对第3代半月板细胞的毒性,通过肌袋内植入试验评价支架材料的体内组织相容性.结果:扫描电镜下可见:不同比例CS/CPP复合支架材料呈三维多孔的结构.复合第3代半月板细胞体外培养7d,细胞在支架材料上均匀分布,紧贴支架铺展伸长,生长良好.MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DF培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05),支架无细胞毒性.肌袋内植入试验评价:肌袋内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染.术后1周植入体周围有较多中性粒细胞浸润;术后2～8周植入体周围中性粒细胞浸润逐渐减少,出现淋巴细胞浸润,淋巴细胞多于中性粒细胞,纤维囊壁厚薄不均;3个月后植入体周围未见炎症细胞浸润,主要为胶原纤维和成纤维细胞.随植入时间的延长,炎症细胞浸润逐渐减少,浸润范围逐渐缩小,包膜先逐渐变厚再变薄,植入材料内部逐渐有组织长入,并且逐渐降解.结论:CS/CPP具有良好的细胞相容性和组织相容性,有望成为半月板组织工程的支架材料.
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三种生长因子对人胚半月板细胞增殖及细胞表型的影响
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)单独或联合作用于人胚半月板细胞,探讨半月板组织工程种子细胞大量扩增佳作用组合及浓度.方法 无菌条件下取健康妇女意外流产并自愿捐献的4个月人胚半月板,体外分离、培养半月板纤维软骨细胞,用Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和Aggrecan免疫荧光染色检测其性状.取第3代细胞贴壁后使用血清饥饿法同步化细胞,加入1GF-1(1、10、50、100 μg/L)、TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、50.0 μg/L)、bFGF(5、10、50、100、200 μg/L)作用于半月板细胞,每样本设8个复孔和阴性对照组,分别于作用后48 h和72 h采用MTT法检测软骨细胞增殖情况,以确定各生长因子佳效应浓度.同法设7个组,每组8个复孔,分别为:阴性对照组、bFGF佳效应浓度组(50 μg/L)、TGF-β1佳效应浓度组(5 μg/L)、IGF-1佳效应浓度组(50 μg/L)、bFGF和TGF-β1佳效应浓度联用组、bFGF和IGF-1佳效应浓度联用组、TGF-β1和IGF-1佳效应浓度联用组,48 h和72 h用MTT比色法得出吸光度(A)值并分析软骨细胞的增殖效应.结果 第3代半月板细胞扩增前后细胞均表达Ⅱ型胶原和Aggrecan蛋白.48 h和72 h 50 μg/L IGF-1,5μg/L TGF-β1及50 μg/L bFGF浓度组与对照组相比均具有促细胞增殖作用,且差异有统计学意义(P＜0.05);此即为各生长因子佳效应浓度.生长因子联用:bFGF 50 μg/L与IGF-1 50μg/L联用、IGF-1 50 μg/L与TGF-β15μg/L联用具有协同效应,差异有统计学意义(P＜0.05);bFGF 50 μg/L与TGF-β1 5μg/L联用无协同效应,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 bFGF、TGF-β1、IGF-1单独使用均可体外扩增人胚半月板细胞,佳效应浓度联用时bFGF/IGF-1、IGF-1/TGF-β1的扩增效果优于各自单独使用,可用于体外大量扩增种子细胞.
关键词： 半月板细胞 胰岛素样生长因子1 转化生长因子β1 碱性成纤维细胞生长因子 增殖
