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半月板纤维软骨细胞与壳聚糖/聚磷酸钙体外复合培养的实验研究
目的:观察半月板纤维软骨细胞在不同配比壳聚糖/聚磷酸钙( chitosan/ calcium polyphosphate,CS/CPP)支架材料上的生长状况,优选佳配比CS/CPP生物材料作为组织工程半月板支架材料.方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第3代,并对其进行表型鉴定.采用共混—化学交联固化—冷冻干燥法将CS、醛基化海藻酸钠(aldehyde alginate,ADA)、CPP有机地结合起来,制备4种不同配比的新型组织工程半月板复合支架材料.将体外分离培养的第3代半月板细胞,通过二次沉淀接种法将其种植于不同配比的CS/CPP支架上,体外培养7天,采用相差倒置显微镜、SEM、HE染色观察细胞在支架上的形态、黏附、生长情况.结果:体外分离培养的第3代半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型.相差倒置显微镜下可见,细胞在支架上黏附良好；扫描电镜下可见,细胞在支架上均匀分布,细胞多数呈多角形,并有基质分泌；HE染色结果显示,有细胞长入到三维支架材料内部.其中,半月板细胞在3∶7的CS/CPP支架材料上单位面积内数目多,生长旺盛,细胞外基质分泌多.结论:三维多孔的CS/CPP复合材料能促进半月板纤维软骨细胞的黏附、生长和增殖,其中3∶7的CS/CPP支架材料细胞相容性和生物活性好,适于半月板纤维软骨细胞粘附和生长,并且能促进半月板细胞增殖和维持其表型,有望成为组织工程半月板良好的支架载体.
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壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的生物相容性研究
目的:评价比较不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(Chitosan/Calcium polyphosphate,CS/CPP)复合支架的细胞相容性和组织相容性,探讨其应用于组织工程半月板支架材料的可行性.方法:采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况.采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液对第3代半月板细胞的毒性,通过肌袋内植入试验评价支架材料的体内组织相容性.结果:扫描电镜下可见:不同比例CS/CPP复合支架材料呈三维多孔的结构.复合第3代半月板细胞体外培养7d,细胞在支架材料上均匀分布,紧贴支架铺展伸长,生长良好.MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DF培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05),支架无细胞毒性.肌袋内植入试验评价:肌袋内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染.术后1周植入体周围有较多中性粒细胞浸润;术后2～8周植入体周围中性粒细胞浸润逐渐减少,出现淋巴细胞浸润,淋巴细胞多于中性粒细胞,纤维囊壁厚薄不均;3个月后植入体周围未见炎症细胞浸润,主要为胶原纤维和成纤维细胞.随植入时间的延长,炎症细胞浸润逐渐减少,浸润范围逐渐缩小,包膜先逐渐变厚再变薄,植入材料内部逐渐有组织长入,并且逐渐降解.结论:CS/CPP具有良好的细胞相容性和组织相容性,有望成为半月板组织工程的支架材料.
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不同配比壳聚糖/聚磷酸钙复合支架应用于半月板的生物相容性研究
目的 评价对比不同配比壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的体外生物相容性,观察半月板纤维软骨细胞在不同配比支架材料上的生长情况,选出佳配比CS/CPP生物材料用于半月板的治疗.方法 利用ADA将CS与CPP混合液交联,制备不同配比的CS/CPP复合支架材料.采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况.采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液的毒性,通过细胞接种的方法评价支架材料的生物相容性.结果 扫描电镜下,CS/CPP复合支架材料均呈三维多孔结构;细胞在支架材料上粘性良好,分布均匀,生长良好,其中配比为3∶7CS/CPP复合支架材料上细胞粘性好,黏附细胞数量多.不同配比CS/CPP复合支架材料不同浓度浸提液的毒性均不高于1级,全部合格,配比为3∶7CS/CPP复合支架材料浸提液细胞相对增殖高、毒性小,细胞相容性好,与其它配比相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同配比壳聚糖/聚磷酸钙均具有良好的细胞相容性,其中配比为3∶7CS/CPP复合支架材料生物相容性好,有望成为组织工程半月板的支架载体.
