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TopoⅢα文献资料
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BLAP75蛋白与DNA螺旋酶BLM以及拓扑异构酶TopoⅢα的相互作用
目的 确定BLAP75蛋白与BLM蛋白及TopoⅢα蛋白的相互作用及作用位点.方法 构建一系列携带MBP标记的不同BLAP75载体,通过体外纯化蛋白结合实验检测BLAP75与BLM、TopoⅢα的相互作用位点,并在真核细胞中通过免疫共沉淀方法进行验证;运用RNA干扰(RNAi)技术特异性抑制BLAP75的表达,并利用Western印迹法检测其对BLM和TopoⅢα蛋白表达的影响.结果 BLAP75与BLM和TopoⅢα蛋白的结合位点位于BLAP75的N端区域; BLAP75与BLM的直接相互作用需要DNA的介导;当BLAP75蛋白表达量减少时,BLM和TopoⅢα蛋白量也随之减少.结论 细胞内BLM和TopoⅢα蛋白均结合在BLAP75的氨基端部分;BLAP75对TopoⅢα和BLM的蛋白水平具有重要影响.
