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BLAP75蛋白与DNA螺旋酶BLM以及拓扑异构酶TopoⅢα的相互作用
目的 确定BLAP75蛋白与BLM蛋白及TopoⅢα蛋白的相互作用及作用位点.方法 构建一系列携带MBP标记的不同BLAP75载体,通过体外纯化蛋白结合实验检测BLAP75与BLM、TopoⅢα的相互作用位点,并在真核细胞中通过免疫共沉淀方法进行验证;运用RNA干扰(RNAi)技术特异性抑制BLAP75的表达,并利用Western印迹法检测其对BLM和TopoⅢα蛋白表达的影响.结果 BLAP75与BLM和TopoⅢα蛋白的结合位点位于BLAP75的N端区域; BLAP75与BLM的直接相互作用需要DNA的介导;当BLAP75蛋白表达量减少时,BLM和TopoⅢα蛋白量也随之减少.结论 细胞内BLM和TopoⅢα蛋白均结合在BLAP75的氨基端部分;BLAP75对TopoⅢα和BLM的蛋白水平具有重要影响.
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沉默BLAP75基因对电离辐射诱导DNA损伤的影响
目的：研究BLM结合蛋白75（BLAP75）在电离辐射诱导DNA损伤反应中的生物学效应。方法运用RNA干扰技术，在细胞中特异性沉默BLAP75基因，然后通过单细胞凝胶电泳技术来研究电离辐射诱导DNA损伤程度的变化，并且通过再次表达BLAP75来拯救沉默BLAP75所致的实验表型，以及应用Western blot方法研究DNA损伤反应中的磷酸化修饰。结果与未转染的293T对照组细胞相比，电离辐射在沉默了BLAP75基因的细胞中会诱导更多的DNA断裂，并且在此细胞中重新表达BLAP75则能降低DNA断裂数量至对照组细胞水平；γ射线照射后，细胞周期检查点激酶2（Chk2）的磷酸化程度比阴性对照组细胞增强。结论 BLAP75能减少电离辐射诱导的DNA损伤，在电离辐射损伤修复中可能具有重要作用。
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辐射诱导的BLAP75蛋白的磷酸化和核定位的改变
目的 研究BLAP75蛋白对紫外线辐射和电离辐射的反应.方法 运用Western印迹和间接免疫荧光技术,检测紫外线辐射和电离辐射对BLAP75蛋白的影响,以及采用蛋白磷酸酶反应来确定BLAP75蛋白的翻译后修饰类型.结果 当细胞受到紫外线或者γ射线的照射后,BLAP75蛋白会受到翻译后修饰,并且咖啡因能部分抑制这种蛋白修饰.电离辐射还会导致BLAP75被招募到细胞核聚焦体.结论 紫外线辐射和电离辐射能诱导BLAP75蛋白的磷酸化,ATM或者ATR负责磷酸化部分BLAP75蛋白,而且BLAP75很可能在细胞核聚焦体参与DNA损伤修复.
