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人oGPCRs与Gi1α的基因融合及其在昆虫细胞Sf9 的表达
目的 获得人孤儿G蛋白偶联受体(oGPCR)与G蛋白α亚基(Gi1α)的融合基因及其表达蛋白.方法 采用RT-PCR法,从人HepG2细胞扩增oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174和Gi1α的完整表达序列,运用重叠延伸PCR法扩增得到人oGPCR成员GPR45, GPR85, GPR174 分别与Gi1α的融合基因,将各融合基因与供体质粒pFASTBac1重组,而后分别转化DH10Bac菌株获得杆状病毒穿梭杆粒,制备重组杆状病毒并感染Sf9细胞,收获融合蛋白,经Western印迹鉴定.结果 得到了上述oGPCR成员的融合基因oGPCRs-Gi1α,并使之在昆虫细胞成功表达,制备了足量的oGPCRs-Gi1α融合蛋白.结论 oGPCR可与Gi1α成功融合,昆虫细胞表达体系是制备融合蛋白的理想手段,为今后深入开展oGPCRs的相关研究提供了保障.
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可乐定对严重烫伤大鼠心肌Giα表达的影响
目的探讨可乐定对严重体表烫伤大鼠心肌抑制性G蛋白α亚基(Gia)表达的作用及机制.方法通过建立大鼠背部30%体表面积Ⅲ度烫伤模型,分别采用间接酶法、Western blot测定了烫伤大鼠早期心肌AC活性、Gia水平.结果可乐定0.3、1、3 mg/kg,可剂量依赖性地抑制烫伤后心肌Giα的增加.可乐定0.3～3 mg/kg还可显著升高烫伤后心肌AC基础活性,而1～3 mg/kg可明显升高心肌Gpp(NH)p刺激活性,0.3 mg/kg对心肌Gpp(NH)p刺激活性无明显影响;I1咪唑啉受体阻断剂efaroxan(5、10 mg/kg)可部分逆转可乐定抑制烫伤大鼠心肌Giα升高的作用0结论可乐定可抑制烫伤后心肌Giα的升高,其机制可能与可乐定激动I1咪唑啉受体有关.
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骨纤维异常增殖症发病机制的研究进展
骨纤维异常增殖症是一种口腔颌面部较常见的纤维骨病变,近年来对其发病机制研究较多.本文就激活型G蛋白α亚基基因(Gsa基因)突变在骨纤维异常增殖症发病中的作用和骨纤维异常增殖症患者的骨病变、内分泌功能亢进及皮肤色素斑的具体机制作一综述.
