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应用亲合层析结合液相色谱串联质谱法发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白
目的:应用刀豆素A(ConA)亲合层析结合液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白.方法:收集生长2周的结核菌培养液,经过滤浓缩得到培养滤液蛋白(culture filtrate protein, CFP).应用ConA亲合层析法纯化CFP中的糖蛋白,经SDS-PAGE电泳结合考马斯亮蓝染色后,对蛋白条带进行胰蛋白酶消化.应用HPLC-MS检测消化后的糖肽结构并与结核菌H37Rv蛋白质数据库进行比对,寻找新的糖蛋白.结果:CFP经ConA亲合层析纯化后的电泳结果显示有数条蛋白条带出现,经筛选相对分子质量26×103蛋白可能为糖蛋白.酶切消化该蛋白得到的多肽在HPLC-MS上保留时间26.24 min处显示有多肽色谱峰,其对应的一级MS图提示该多肽总质量为1 467原子质量单位(AMU),二级MS图显示为多个质荷比(m/z)逐级减少为54(一个己糖的分子质量单位为162 AMU)的多肽,提示有己糖丢失.同时,MS分析肽链氨基酸序列并证实蛋白的糖基化存在.与结核菌H37Rv蛋白质数据库比对结果提示,结核菌分泌的26×103蛋白为一新的糖蛋白,即铜-锌超氧化物歧化酶.结论:应用ConA亲合层析结合HPLC-MS发现了一个新的结核分枝杆菌糖蛋白.
关键词： 液相色谱串联质谱 结核分枝杆菌 刀豆素A亲和层析 铜-锌超氧化物歧化酶 -
大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响及其对心肌的保护作用
目的:探讨大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响,阐明其对心肌的保护作用.方法:将雄性Wistar大鼠建立糖尿病模型后随机分为糖尿病组和大豆皂苷给药组,仅注射等体积0.1 mol·L-1柠檬酸缓冲液的大鼠作为对照组,对照组、糖尿病组和大豆皂苷给药组动物分别每日灌胃给予生理盐水、生理盐水和大豆皂苷(10mg· kg-1),共3个月.取心肌组织并采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定大鼠心肌组织中NOX4和p22phox mRNA表达；免疫组织化学方法检测心肌组织中铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达；HE染色检测心肌病理学改变.结果:与对照组比较,糖尿病组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白表达均显著升高(P＜0.01),而Cu-Zn-SOD蛋白表达显著降低(P＜0.01)；与糖尿病组比较,大豆皂苷给药组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phoxmRNA和CTGF蛋白表达均显著降低(P＜0.01),但Cu-Zn-SOD蛋白表达显著增加(P＜0.01)；对照组和大豆皂苷给药组上述指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).HE染色可见对照组大鼠心肌细胞排列紧密整齐,糖尿病组大鼠心肌细胞排列疏散紊乱,间质可见炎细胞浸润；大豆皂苷给药组大鼠心肌细胞基本整齐紧密.结论:大豆皂苷能降低糖尿病大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白的表达,提高Cu-Zn-SOD蛋白的表达,减轻氧化应激对心肌的损害,从而对心肌有一定的保护作用.
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盐酸阿霉素对大鼠心肌损伤的分子机制研究
目的研究盐酸阿霉素对大鼠心肌损伤的分子机制.方法将雄性SD大鼠40只随机分成4组(每组10只):对照组,盐酸阿霉素低剂量组(10 mg*kg-1),盐酸阿霉素中剂量组(20 mg*kg-1),盐酸阿霉素高剂量组(40 mg*kg-1),对后3组分别一次性腹腔注射不同剂量的盐酸阿霉素,制备大鼠心肌损伤模型.采用硫代巴比妥酸(TBA)荧光分光光度法测定大鼠血清脂质过氧化产物丙二醛含量.并分别测定铜-锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性;运用RT-PCR方法分析相关基因的表达.结果盐酸阿霉素中、高剂量组大鼠血清中丙二醛含量高于对照组(P<0.05,P<0.01);实验组铜-锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性均较对照组降低,其基因表达随盐酸阿霉素剂量的增加而不同程度的下调.结论抗氧化酶基因表达的改变可能是盐酸阿霉素导致心肌损伤的分子机制之一.
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CCK-8对LPS诱导大鼠TASMCs CuZn-SOD基因表达影响的受体机制
目的 探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs) CuZn-SOD基因表达影响的受体机制.方法 用贴块法培养大鼠TASMCs,经CCK-8、LPS、CR-1409、CR-2945、CCK+LPS、CR-1409+LPS、CR-2945+LPS、CR-1409+CCK-8+LPS、CR-2945+CCK-8+LPS及溶剂单独或共同孵育细胞,用RT-PCR技术检测CuZn-SOD mRNA表达.结果 对照组TASMCs CuZn-SOD mRNA低水平表达,LPS 诱导TASMCs CuZn-SOD mRNA表达上调(P<0.05),CCK-8预处理后,LPS对TASMCs CuZn-SOD mRNA表达的诱导作用可部分受抑,预先用CR-1409(1×10-5 mol/L)、CR-2945(1×10-5 mol/L)处理后,再分别加入LPS和CCK-8,CR-1409+CCK-8+LPS、CR-2945+CCK-8+LPS两组CuZn- SOD mRNA表达均高于CCK-8+LPS组(P<0.01),但仍低于LPS 组(P<0.05),其中CR-2945的拮抗作用比CR-1409稍明显; CR-1409、2945单独作用与对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论 CCK-8通过其受体下调LPS 对TASMCs CuZn-SOD基因表达的诱导作用,其中CCK-BR较CCK-AR作用稍大.
关键词： 八肽胆囊收缩素 脂多糖 血管平滑肌细胞 CCK受体 铜-锌超氧化物歧化酶
