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抗平颏海蛇短链神经毒素全人源单克隆抗体的筛选、制备及生物活性研究
目的 重组表达3种平颏海蛇短链神经毒素,利用噬菌体抗体库筛选制备全人源抗毒素单克隆抗体并评估其生物活性.方法 以重组表达纯化的神经毒素蛋白作为抗原,从自主构建的噬菌体抗体库中筛选获得噬菌体抗体,经序列测定确定其抗体类型后构建完整抗体.利用真核表达系统表达纯化抗体后鉴定其抗原结合活性、生化特性及药代动力学特性.在体内验证抗体药物的抗毒素作用.结果 经过4轮筛选,获得2株能同时结合3种神经毒素的噬菌体单链抗体,并将其制备成完整的抗体,进一步证实所获得的抗体可特异性结合3种抗原.2株全人源抗体均可拮抗神经毒素对昆明小鼠的致死作用.结论 利用重组神经毒素和噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗平颏海蛇短链神经毒素的全人源治疗性抗体.
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平颏海蛇皮中新型硫酸皮肤素的分离纯化和结构表征
目的 从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征.方法 对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化.运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其二糖组成.结果 获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征.HSAP-2中含有4种二糖,主要为单硫酸化二糖(4S和6S);单糖组成中含有艾杜糖醛酸(IdoA)、葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS).结论 从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础.
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平颏海蛇化学成分的研究Ⅱ
目的 研究平颏海蛇干体的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、重结晶等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从平颏海蛇干体中分离得到10个化合物,分别鉴定为:棕榈酸(1),油酸甲酯(2),油酸(3),3-methoxycholest-5-ene(4),Stigmasta-5,24(28)-diene,3-methoxy-,(3β,24E)(5),Tetracosanamide,N-[(1S,2R,3E)-2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3,7-heptadecadien-1-yl](6),5 α-Cholestan-3β-ol,5,6β-dibromo-,nonanoate(7),Cholestane-3,5,6-triol,3-nonanoate(8),胆甾-5-烯-3β,7β-二醇(9),胆甾-5-烯-3β,7α-二醇(10).结论 所有化合物均为首次从平颏海蛇中分离得到.
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海蛇咬伤及抗海蛇毒血清的研制与应用
海蛇咬伤是我国东南沿海地区严重的一种海洋生物伤.海蛇为爬行纲蛇目海蛇科的一类毒蛇,世界上现有记录的海蛇分为2亚科16属约50种,主要分布于太平洋及印度洋热带与亚热带的暖水海域.我国记录的有10属16种,分布于辽宁、山东、江苏、浙江、台湾、福建、广东、广西、海南诸省区的海区[1],以北部湾的海蛇资源为丰富.海蛇均为毒蛇,其毒性远大于陆地毒蛇,人的中毒致死量为3.5mg左右[2],一般纯海蛇毒的LD50均小于0.10mg/kg,如常见的青环海蛇为0.05mg/kg,平颏海蛇为0.06mg/kg.
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"精制多价抗海蛇毒血清"的制作
目的海蛇均为前沟牙毒蛇,分布于太平洋及印度洋沿岸,大西洋没有海蛇.中国产海蛇16种,分布于北起辽宁、南至海南及广西沿海,分布较广、数量较多及蛇伤发病率较高的海蛇为青环海蛇(Hydrophis cyanocinctus)和平颏海蛇(Laticauda semifasciata).调查结果表明,被海蛇咬伤如不及时处理,通常有50%的患者死亡.在中国广西北海市每年均有被海蛇咬伤中毒致死的病例.为研制中国、日本及东南亚沿海国家主要有毒海蛇青环海蛇和平颏海蛇咬伤的有效治疗药"多价抗海蛇毒血清",填补急救医学空白.
