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小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因转染胃癌GC9811细胞的功能研究
通过RT-PCR从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞扩增出编码小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的全长cDNA并构建其真核表达载体pCDNA3.1/V5-HisAα1,3GT,pCDNA3.1/V5-HisAα1,3GT通过脂质体转染胃癌GC9811细胞,使胃癌细胞表达Galα(1,3)Gal糖表位,G418筛选2个月内的阳性克隆,RT-PCR鉴定转染细胞,间接免疫荧光染色检测转染真核表达载体的癌细胞Galα(1,3)Gal的表达,利用人体血清内针对Galα(1,3)Gal糖表位的天然抗体对癌细胞进行杀伤.结果表明,成功构建了α1,3-半乳糖基转移酶基因真核表达载体,转染α1,3-半乳糖基转移酶基因的癌细胞高表达Galα(1,3)Gal糖表位,人血清对表达该表位的癌细胞具有杀伤作用.
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异种移植中转基因动物策略研究进展
近年来,在同种移植研究的基础上,异种移植的研究也进行了大量的工作,突出的成绩表现在异种移植免疫障碍阶段的划分和定义,即超急排斥反应、急性血管排斥(有时也称延迟排斥)、细胞排斥或慢性排斥、生理功能及其它.根据异种移植免疫学理论,利用转基因技术,建立转基因动物克服超急免疫排斥是异种移植研究的又一进步,显示转基因动物具有很大的发展前景,使异种移植走进临床成为可能.本文将就近年异种移植免疫学理论及根据其机制、利用转基因动物克服免疫排斥研究状况作一综述.
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小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及测序
目的克隆α1,3-半乳糖基转移酶的序列,为进一步利用其构建真核表达载体,对肿瘤进行基因治疗奠定基础.方法从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUCm-T测序载体.经DNA测序证实序列.结果经RT-PCR扩增出大小约为1.2kb的基因片段,成功克隆入pUCm-T载体.结论成功地克隆α 1,3-半乳糖基转移酶基因序列,为进一步肿瘤基因治疗奠定了基础.
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小鼠α1,3-半乳糖糖基化修饰对人肝癌HuH7细胞生物学特性的影响
目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性.方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试验分析稳定表达株相关生物学特性变化.结果:转染有α1,3GT的HuH7经RT-PCR法检测到有α1,3GT的表达,免疫荧光镜检测其细胞表面有明显的Galα(1,3)Gal糖表位表达,转染细胞的增殖能力明显降低,同时促进细胞凋亡.结论:转染α1,3-半乳糖基转移酶基因可明显抑制人肝癌细胞HuH7的恶性生物学行为,具有潜在的临床应用价值.
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小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其重组真核表达载体的构建
目的: 构建α1,3-半乳糖基转移酶的重组真核表达质粒pcDNA3.1/V5-HisAα1,3GT,为进一步利用其进行胃癌的基因治疗奠定基础. 方法: 从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUCm-T测序载体. 经DNA测序证实序列无误后,将α1,3-半乳糖基转移酶基因片段亚克隆入pcDNA3.1/V5-HisA真核表达载体. 结果: 经RT-PCR扩增出大小约为1.2 kb的基因片段,成功克隆入pUCm-T载体. 经DNA测序证实为α1,3-半乳糖基转移酶(α1, 3-galactosyltransferase, 3GT),大小为1221 bp,编码序列及读框均正确. 经亚克隆酶切鉴定,获得携有α1,3GT基因的重组质粒pcDNA3.1/V5-HisAα1,3GT. 结论: 成功地构建α1,3GT真核表达载体,为进行肿瘤基因治疗奠定了基础.
