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牙周膜单克隆细胞间成骨异质性及组蛋白乙酰转移酶影响细胞交流的研究
目的 探讨成骨分化能力存在差异的正常牙周膜单克隆细胞之间信息交流对单克隆细胞成骨分化能力的影响,以及组蛋白乙酰转移酶在其中的作用.方法 通过有限稀释法获取正常牙周膜来源的单克隆细胞,采用间接共培养法在6孔板铺有一定成骨能力的单克隆细胞,设置空白对照组、成骨弱组及成骨强组,分别对应Transwell小室不加细胞、加成骨能力弱和成骨能力强的细胞,每组设置3个复孔,间接共培养4 d后移除Transwell小室进行成骨诱导,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)及茜素红染色检测3组下层细胞成骨诱导后成骨能力的改变,蛋白质印迹法检测下层细胞组蛋白H3的乙酰化水平,qPCR比较组蛋白乙酰转移酶表达的改变.结果 流式细胞术检测结果显示牙周膜单克隆细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105和CD146,表达率分别为(99.80±0.02)%、(99.36±0.18)%、(99.41±0.05)%和(95.10±2.11)%;阴性表达CD31和CD34,表达率分别为(0.29±0.11)%和(0.22±0.13)%.茜素红及油红O染色显示单克隆细胞具有成骨成脂分化能力.碱性磷酸酶和茜素红染色结果显示同一个体牙周膜来源的不同单克隆细胞间存在成骨差异.间接共培养实验显示成骨强和弱的单克隆细胞成骨相关基因骨钙蛋白(分别为14.24±5.60、4.78±2.90)及Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)mRNA表达量(分别为2.75±1.44、1.61±0.44)均显著高于空白对照组(骨钙蛋白与RUNX2分别为1.00±0.47和1.00±0.39)(P<0.05);成骨强组骨钙蛋白及RUNX2 mRNA相对表达量均显著高于成骨弱组(P<0.05).蛋白质印迹法结果显示,成骨强及成骨弱组组蛋白H3乙酰化水平[分别为(0.76±0.09)和(0.54±0.12)]均显著高于空白对照组(0.30±0.04)(P<0.05).qPCR结果显示组蛋白乙酰转移酶中KAT6A变化显著,趋势与组蛋白H3的乙酰化水平趋势相同.结论 正常牙周膜来源的单克隆细胞间成骨分化能力存在差异,成骨能力强的单克隆细胞可能通过促进其他细胞KAT6A上调影响其组蛋白乙酰化水平,促进其成骨分化.
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微波辐射损伤对雷达作业人员精子结构及功能的影响
目的 探讨雷达微波辐射对雷达作业人员精子结构及功能的影响,并对其相关机制进行研究. 方法 纳入某部雷达场站从事雷达操作任务频繁受到微波辐射的男性现役军人30名,测量雷达微波辐射的强度.将不接受雷达微波辐射的空军总医院研究生、进修生30名作为对照组.受试者均禁欲5～7 d后采集精液于洁净的精液采集盒中.通过彩色精子质量分析系统检测受试者精子密度、a级精子百分率、b级精子百分率、c级精子百分率、d级精子百分率、头部畸形率等精液常规数据.在透射电子显微镜下观察精子超微结构,用流式细胞仪检测精子凋亡,二维电泳法检测精子Tip60、p53、tubulin的表达.比较两组受试者精液常规检查结果及精子凋亡检测结果. 结果 ①精液常规检测结果显示,试验组a级精子、b级精子百分率显著低于对照组(t=5.815、10.153,P＜0.01),c级精子百分率、d级精子百分率显著高于对照组(t=9.897、14.394,P＜0.01).②电子显微镜检测结果显示,试验组精子在雷达微波辐射后可出现尖头、短尾、无尾、顶体内包涵体、顶体空泡、线粒体肿胀、线粒体缺失等显微形态异常.③两组受试者精液中活精子、凋亡精子、死亡精子构成比差异有统计学意义(x2=17.029,P＜0.01),试验组活精子率明显低于对照组(x2=6.817,P＜0.01).④本组受试者精液标本中未见组蛋白乙酰化转移酶Tip60的明显表达. 结论 雷达微波辐射对雷达作业人员的精子形态、超微结构、凋亡、精子运动参数有明显影响.其机制可能不是通过Tip60的途径发挥作用.
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组蛋白修饰酶与子宫内膜癌发生发展关系的研究进展
表观遗传学是研究没有细胞核DNA序列改变的情况时基因功能可逆的、可遗传的改变.这些改变包括DNA甲基化、组蛋白修饰、微小RNA (micro RNA)和基因组印迹等.组蛋白是核小体的关键成分,组蛋白修饰在遗传学中意义重大.组蛋白修饰酶与人类肿瘤的关系日渐成为研究热点,而在子宫内膜癌领域相关研究较少.现对近5年来相关文献进行汇总,从组蛋白乙酰化、组蛋白甲基化、组蛋白修饰与DNA甲基化关系三个方面着手,阐述组蛋白修饰酶与子宫内膜癌的研究进展.
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乙酰化酶基因 RNA 干扰文库的构建及其对 HepG2．2．15细胞的感染
目的：构建人类基因组中16个组蛋白乙酰化酶的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体文库，为进一步探索表观遗传学基因在 HBV 调控中的作用机制提供有利工具。方法根据 shRNA 引物设计原则，针对每个基因选择8对确保干扰效率的 shRNA 序列（A～H），将引物退火后连接至 shRNA空慢病毒载体上转化，PCR 法验证菌落克隆，确认阳性克隆；对质量合格的质粒再进行单切酶验证。分别将同一基因的4个 shRNA 慢病毒质粒混合，分别包装病毒。293T 细胞转染48 h 和72 h 后收集病毒粗液，感染 HepG2．2．15细胞。感染72 h 后用荧光显微镜观察并评估荧光细胞比例。结果针对16个乙酰化酶基因，构建128个慢病毒载体 RNA 干扰（RNAi）文库，72 h 后慢病毒感染 HepG2．2．15细胞的效率＞80％。结论成功构建16个组蛋白乙酰化酶的 shRNA 慢病毒载体，从而为研究人组蛋白乙酰化酶对 HBV 复制的影响奠定了坚实的基础。
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慢性肾衰竭大鼠血清对主动脉平滑肌细胞组蛋白乙酰转移酶p300及激活转录因子4表达的影响
目的 研究慢性肾衰竭大鼠血清对主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)泛素-蛋白酶体系统、激活转录因子4(ATF4)及组蛋白乙酰转移酶p300表达的影响,初步探讨慢性肾衰竭血清对主动脉VSMC作用的可能机制.方法 建立慢性肾衰竭大鼠模型,采集其血清;采用原代培养的大鼠主动脉VSMC,分正常组(正常大鼠血清刺激)和慢性肾衰竭血清组(慢性肾衰竭血清刺激).用不同大鼠血清刺激72 h后,分别采用实时定量PCR、Western印迹及特异底物反应法检测慢性肾衰竭血清对VSMC泛素、泛素激活酶(ubiquitin activating enzyme,简称E1)、β转导重复相容蛋白1(β-transducin repeat containing protein 1,β-TrCP1)、p300及ATF4mRNA表达,E1、β-TrCP1、p300及ATF4蛋白表达及蛋白酶体活性的影响.结果 (1)慢性肾衰竭血清使主动脉VSMC泛素、E1、β-TrCP1、p300及ATF4mRNA表达增加,与正常组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.01),随时间延长;慢性肾衰竭血清组泛素、E1、β-TrCP1、p300及ATF4 mRNA表达逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)慢性肾衰竭血清使主动脉VSMC E1、β-TrCP1、p300及ATF4蛋白表达增加,与正常组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01);随时间延长,慢性肾衰竭血清组E1、β-TrCP1及p300蛋白表达逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01).ATF4表达有下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).(3)慢性肾衰竭血清刺激后蛋白酶体活性增强,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);随时间延长,慢性肾衰竭血清组蛋白酶体活性逐渐升高(P＜0.01).结论 慢性肾衰竭血清可致大鼠主动脉VSMC泛素-蛋白酶体途径活化,但其对ATF4的降解受阻,可能和p300表达增高有关.这为进一步采取措施,防治慢性肾衰竭血管病变提供了一定的理论和实验依据.
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组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶在细胞周期中的调控作用
随着组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶的克隆,人们开始重视组蛋白乙酰化平衡在细胞周期中的调控作用.细胞周期进程中的两个控制点容易受到众多因素的干扰,导致细胞增生、静止或死亡.现介绍组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶的研究进展及其在细胞周期进程中的调控作用,为临床上以肿瘤为代表的多种疾病的诊断和治疗提供一些指导作用.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗多发性骨髓瘤的研究进展
多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞肿瘤,近年来发现组蛋白去乙酰化酶(HDAC)在MM中呈过表达,并且出现HDAC过表达的MM患者预后常较差.蛋白的乙酰化可参与多种生物学过程.组蛋白乙酰化转移酶(HAT)和HDAC可使正常机体内乙酰化水平保持动态平衡.组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)是近年来出现的治疗MM的新型靶向药物,其治疗MM的疗效在大量临床试验中已经得到证实.笔者拟就HDACI治疗MM的研究进展进行综述.
