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浙江温岭167例非综合征型聋患者12S rRNA基因突变频谱分析
目的 研究浙江温岭地区非综合征型聋患者的临床和分子遗传学特征.方法 收集浙江温岭167例非综合征型聋患者,对线粒体12S rRNA基因进行突变筛查,从种系发生、结构-功能相关性及正常对照组的发生频率等方面评估12S rRNA基因变异与聋病的相关性.结果 12S rRNA基因上共鉴定23个变异,其中1555A＞G、1027A＞G和961位点变异分别占3.59％、0.60％和10.18％.872G＞A突变位于12S rRNA基因的高度保守区域且未在449例正常对照组中发现,可能增加耳毒性药物的敏感性,其他变异位点为多态性位点.结论 绘制温岭市非综合征型聋患者线粒体12S rRNA基因突变频谱,发现14.97％患者携带聋病相关12S rRNA基因突变.这些工作为聋病分子病因学研究、温岭地区聋病预防重点以及诊断方法的研发和聋病治疗提供重要数据.
关键词： 听力障碍 氨基糖苷类 突变 线粒体 12S rRNA基因 -
非综合征耳聋患者线粒体DNA12S rRNA及tRNAser(UCN)基因序列分析
目的:探讨线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA) 12S rRNA基因及tRNASer(UCN)基因突变与非综合征耳聋的相关性,以及常见致聋突变携带频率.方法:收集非综合征耳聋患者135例和听力正常对照人群126例的外周血样本,常规方法提取基因组DNA,PCR扩增mtDNA 12S rRNA基因及tRNASer(UCN)基因,扩增产物经直接测序进行耳聋相关突变的鉴定.结果:135例非综合征耳聋患者中共检测到11种mtDNA 12S rRNA碱基变异,其中4种已知致病突变的携带率分别为:A827G,4.4％；T961C,1.5％;T1095C,0.7％;A1555G,1.5％.两组人群均未检测到12S rRNA C1494T突变以及tRNASer(UCN)基因任何形式的致聋突变.结论:mtDNA 12S rRNA是南京地区汉族非综合征耳聋人群的突变热点基因,其常见致聋突变总携带率约为8.1％.
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从12S rRNA基因序列差异分析黑斑蛤蚧和红斑蛤蚧的进化关系
目的获得黑斑蛤蚧和红斑蛤蚧两个类群6个线粒体12SrRNA基因片段序列,分析黑斑蛤蚧和红斑蛤蚧的进化关系,进而探讨蛤蚧种群的遗传变异,为蛤蚧的分类鉴定提供一定的科学依据.方法测定蛤蚧Gekko gecko两个类群6个个体线粒体的12S rRNA基因片断序列,结合多疣壁虎G.japonicus、无蹼壁虎G.swinhonis、铅山壁虎G.hokouensis同源DNA序列进行比较,进行分子系统学分析.结果红斑蛤蚧间变异范围为1.18%～1.91%;黑斑蛤蚧间为2.36%～3.64%;红斑蛤蚧与黑斑蛤蚧之间为4.81%～6.73%;外群壁虎与蛤蚧内群间变异为30.44%～35.69%.结论红斑蛤蚧与黑斑蛤蚧的差异是否达到了亚种级分化的水平,还有待进一步研究.
关键词： 蛤蚧 12S rRNA基因 进化关系 -
117例非综合征型耳聋患者的突变分析
目的 分析苏北地区非综合征型耳聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)患者的基因突变情况.方法 应用Sanger测序技术对117例NSHL患者的GJB2基因编码区、SLC26A4基因的IVS7-2A＞G和2168A＞G突变以及线粒体DNA 12S rRNA的1555A＞G、1494C＞T突变位点进行检测.对未发现突变的患者用靶向捕获联合高通量测序技术进行检测.结果 Sanger测序共发现86例患者(73.50％)携带突变,其中GJB2基因突变61例(52.14％),包括纯合突变22例(18.80％),杂合突变39例(33.33％);SLC26A4基因突变19例(16.24％),其中纯合突变4例(3.42％),杂合突变15例(14.53％);线粒体12SrRNA基因突变6例(5.13％),均属于异质性突变.靶向捕获联合高通量测序在8例患者中共发现4例异常,包括1例RDX基因129_130del和76 79del杂合突变、1例OTOF基因1274G＞C纯合突变、1例SLC26A4基因919-2A＞G和IVS16-6G＞A杂合突变、1例SLC26A4基因919-2A＞G和A1673T杂合突变.结论 苏北地区NSHL患者突变携带率高达73.50％,且以GJB2基因的突变为常见.
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17000名新生儿遗传性耳聋基因突变筛查
目的 应用遗传性耳聋基因芯片对新生儿进行致聋基因突变筛查,评估成都地区新生儿中常见遗传性耳聋基因的突变频率和类型.方法 收集成都地区2012年8月至2013年6月送检的17 000名新生儿足跟血制成干血斑,应用微阵列芯片法检测中国人常见的4个致聋基因的9个突变位点,包括GJB2基因(35 del G、176 del16、235 del C、299 del AT)、GJB3基因(538 C＞T)、SLC26A4基因(IVS7-2 A＞G、2168 A＞G)、线粒体DNA 12S rRNA基因(1555 A＞G、1494 C＞T).对所有阳性结果和随机抽取2％的阴性结果进行测序验证.结果 17 000名新生儿中检出突变者542例,其中GJB2 235delC 254例、176del16 15例、299delAT 55例,GJB3 538C＞T 23例,SLC26A4 2168A＞G 17例、IVS7-2A＞G 128例,线粒体12SrRNA 1494C＞T4例、1555A＞G 42例(含2例复合性突变中有1555A＞G均质突变);另外检出复合性突变6例,分别为GJB2 235delC杂合突变伴有SLC26A4 IVS7-2杂合突变和线粒体DNA12 SrRNA 1555A＞G均质突变各1例,GJB2 299delAT杂合突变伴有GJB3 538C＞T杂合突变和线粒体DNA 12S rRNA 1555A＞G均质突变各1例、伴SLC26A4 IVS7-2A＞G杂合突变2例.测序结果与芯片结果一致.在受检的新生儿中,耳聋基因GJB2,GJB3,SLC26A4和12S rRNA突变总携带率达到3.19％;致药物性耳聋的线粒体DNA基因突变率达到0.27％;GJB2基因与SLC26A4基因突变携带率达2.76％,占基因突变携带人群的86.5％.结论 在无耳聋家族史的新生儿中,4个致聋基因突变均有携带者,GJB2基因突变高于SLC26A4基因突变,两者占比大.致药物性耳聋的线粒体DNA 12S rRNA基因突变在新生儿用药前及时发现,并终生避免接触氨基糖苷类药物,将有利于防止“一针致聋”的发生.在新生儿中开展耳聋基因筛查,对遗传性耳聋的早期诊断和预防,以及成年后的婚育指导具有重要意义.
关键词： 遗传性耳聋 GJB2基因 SLC26A4基因 12S rRNA基因 基因突变 -
云南省部分聋生线粒体DNA12S rRNA A1555G和C1494T的突变
目的 探讨云南省部分特教学校聋生携带氨基糖甙类抗生素致聋相关基因线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA) 12S rRNA A1555G和C1494T的突变率.方法 采集413名耳聋学生及232名健康人群的外周静脉血,提取基因组DNA,PCR扩增含mtDNA 12S rRNA A1555G和C1494T的基因片段,扩增产物经直接测序进行基因突变位点的鉴定.结果 在413名耳聋学生中有10例携带mtDNA 12S rRNA A1555G均质突变,携带率为2.42％.对照组中未检测到该位点的突变.2组人群中均未检测到mtDNA 12S rRNA C1494T突变.结论 云南省部分特教学校聋生携带mtDNA 12S rRNA A1555G的突变率与全国平均水平一致,本研究为明确该地区耳聋的病因、防治及干预提供科学依据.
关键词： 耳聋 线粒体DNA 12S rRNA基因 基因突变 -
扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属
目的 建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种,又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法.方法 从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12S rRNA基因序列,设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12S rRNA基因.以通用引物扩增片段为内部对照,以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定.结果 通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段;特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小:人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值:人100%、鸡99%、鸭100%;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2.5pg;特异引物扩增灵敏度人为2.5pg,鸡、鸭均为200pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出,不受另一种DNA量的干扰;盲测结果准确.结论 本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属.
关键词： 法医物证学 种属鉴定 12S rRNA基因 生物检材
