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大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖、凋亡及其血管内皮生长因子表达的影响
目的 研究大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖、凋亡及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其抑制恶性黑素瘤进展和转移的机制.方法 实验分对照组和大蒜油处理组2组.噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖活性的影响;原位末端转移酶标记法(TUNEL)原位检测黑素瘤B16细胞凋亡情况;免疫组化法测定黑素瘤B16细胞P16和C-myc的表达率;RT-PCR和Western Blot分别检测黑素瘤B16细胞VEGF信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质表达.结果 在50～100 mg/L范围内,大蒜油可显著抑制黑素瘤B16细胞增殖(P＜0.01),且呈剂量、时间依赖性.TUNEL染色显示,100 mg/L大蒜油诱导48 h后,黑素瘤B16细胞的凋亡率明显高于对照组(P＜0.01).免疫组化检测表明,100 mg/L大蒜油组P16蛋白的表达增强,C-myc蛋白的表达率下降,与对照组相比较差异均有统计学意义(P＜0.01).1 00 mg/L大蒜油处理48 h后,VEGFmRNA和蛋白质的表达显著下降,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论 大蒜油可抑制黑素瘤B16细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调C-myc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关;大蒜油还可下调黑素瘤B16细胞VEGF的表达,从而抑制肿瘤细胞生长和扩散.
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木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究
目的 探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxycinnamaldehyde,PHD)对黑素瘤B16细胞体内生长的抑制作用.方法 应用MTS法检测PHD对B16细胞增殖的影响,倒置相差显微镜下观察形态变化.构建黑素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型,分为2组:治疗组小鼠ip2 mg/kg PHD,模型组注射相同体积的生理盐水.观察2组小鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中酪氨酸酶(Tyr)、S-100B、MMP-9、p-P38和p-ERK蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法(HE)分析小鼠肝和肺组织的形态学变化.结果 PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的生长抑制作用(P＜0.01).20μmol/L PHD处理B16细胞48 h后,细胞数量减少,呈典型分化形态.PHD治疗组的肿瘤体积和质量均明显低于模型组(P＜0.01).与模型组相比,治疗组小鼠肿瘤组织中Tyr和p-P38蛋白的表达水平升高,MMP-9、S-100B和p-ERK蛋白表达水平则明显降低.治疗组小鼠肝和肺无明显组织形态学改变,模型组小鼠肺部有肿瘤转移.结论 PHD对小鼠体内黑素移植瘤的生长具有显著抑制作用.
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木鳖子对羟基桂皮醛对黑素瘤B16细胞分化的影响及其机制
目的 探讨木鳖子Momrodica cochinchinensis中单体化合物,尤其是对羟基桂皮醛诱导黑素瘤B16细胞分化的作用.方法 以对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol处理B16细胞48 h后,磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞生长抑制率.以对羟基桂皮醛处理B16细胞24、48、72 h后,倒置相差显微镜和经瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;比色法检测给药后48 h B16细胞中黑色素量和酪氨酸酶活性;RT-PCR法检测酪氨酸酶基因表达.结果 5个单体化合物对B16细胞生长均具有抑制作用,其中对羟基桂皮醛对细胞生长的抑制作用为明显,且具有浓度和时间相关性.对羟基桂皮醛处理B16细胞48 h后,经染色观察到细胞呈树突样生长,表现为典型的细胞分化形态特征,黑色素的量显著增加,酪氨酸酶活性显著增强,上述作用与对照组相比差异显著(P＜0.05).以对羟基桂皮醛处理B16细胞6、12、24h后,酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白-1和酪氨酸相关蛋白-2的基因表达明显上调(P＜0.01),且呈时间相关性.结论 对羟基桂皮醛能够抑制黑素瘤B16细胞增殖,其机制与诱导B16细胞分化相关.
