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Cre重组酶敲除小鼠大脑脚背盖背侧核lacZ基因研究
目的观察Cre重组酶能否敲除双报告Z/EG转基因成熟小鼠大脑脚背盖背侧核局部lacZ基因. 方法用PCR技术对双报告Z/EG转基因鼠系进行基因鉴定,利用立体定位微量注射技术将含有Cre重组酶的病毒载体注射到双报告Z/EG转基因成熟小鼠左侧大脑脚背盖背侧核,将鼠脑冷冻切片行抗绿色荧光蛋白免疫组织荧光染色及PicoGreen对照染色,于Confocal显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果双报告Z/EG转基因鼠所获PCR产物为631 bp;未作任何染色切片在Confocal显微镜下可观察到注射Cre重组酶病毒载体左侧大脑脚背盖背侧核区域有弱绿色荧光,经抗绿色荧光蛋白免疫组织荧光染色后发现此区域有红色荧光.结论 Cre重组酶成功地敲除了双报告Z/EG转基因成熟小鼠大脑脚背盖背侧核局部lacZ基因.
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免疫组织荧光与流式细胞术检测脊髓损伤局部巨噬细胞亚群的比较
目的 比较免疫组织荧光(IHF)与流式细胞术(FCM)检测脊髓损伤(SCu局部M1和M2型巨噬细胞亚群的优缺点.方法 采用纽约大学脊髓损伤仪制做大鼠重物坠落SCI模型.术后7天,分别采用IHF和FCM检测损伤脊髓中M1和M2型巨噬细胞,并进行比较.结果 两种方法均可有效地检测脊髓损伤局部浸润的巨噬细胞及其M1、M2亚群.IHF检测到的M1(CD68+ CCR7+)和M2(CD68+ Arg1+)细胞亚群的比率为2.79 ±0.21,FCM检测到的M1(CD68+ CD86+)和M2(CD68+ CD163+)细胞亚群的比率为2.46 ±0.20,两种方法检测到的结果没有统计学差异(P＞0.05).IHF可对待测的细胞进行定位,但在细胞计数和比例分析方面需要人工完成;而FCM则可以直接自动分析细胞数量和比例,但无法对其进行定位.结论 IHF和FCM在分析脊髓浸润的细胞表型方面各有优缺点,两者结合可有效地分析SCI局部M1和M2巨噬细胞亚群的数量和比例.
