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人类血管内皮生长因子受体VEGF-R3胞外区1-3环cDNA基因的研究
目的 将VEGF-R3(FIT-4)基因片断插入克隆载体并进行分子生物学鉴定,对肿瘤细胞通过淋巴管转移到局部淋巴结的机制进行研究.方法 用T-A克隆的方法 将RT-PCR产物克隆入质粒载体PGEM-T Easy,转染大肠杆菌JM109,进行蓝白斑筛选,获取重组体单酶切电泳图谱.结果 经过RT-PCR扩增,得到VEGF-R3的cDNA,琼脂糖凝胶电泳显示为一条带,经蓝白斑筛选获得基因VEGF-R3的白色克隆,重组质粒单酶切电泳结果 与预期结果 一致.结论 RT-PCR产物可采用T-A克隆,获得的阳性重组体可用于进一步基因表达及基因治疗等研究.
关键词： 血管内皮生长因子受体3 质粒构建 逆转录聚合酶链反应 T-A克隆 蓝白斑筛选 -
羊型布鲁氏菌基因克隆与分析方法研究
目的 羊型布鲁氏菌属于人畜共患病菌,通过克隆分析外膜蛋白omp31-2基因,学习基因的克隆方法和序列比对分析方法.方法 通过提取布鲁氏杆菌基因组,用PCR的方法扩增omp31-2基因并连接到克隆载体上测序比对.结果 本实验成功克隆出omp31-2基因并构建了pMD19T-omp31-2克隆载体.结论 通过本次学习,了解并掌握了引物设计,基因扩增和序列比对分析等分子生物学技术试验方法.
关键词： 外膜蛋白omp31-2 PCR(聚合酶链式反应) 蓝白斑筛选 -
P100蛋白及其片段重组质粒构建与表达
目的 分别将人类p100基因,p100 的SN基因片段和TD片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究P100蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基础.方法 PCR分别扩增出P100蛋白全长,SN片段和TD片段基因的序列,定向克隆至真核表达载体pERFP-CI, 构建相应的3种重组质粒.将构建成功的质粒转染入HeLa 细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达.结果 ① PCR 法获得P100 基因序列, 长度为2 659 bp,SN基因片段1 918 bp,TD基因片段741 bp;②将重组质粒直接进行双酶切鉴定可见P100片段, 将经过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与pERFP-CI载体连接并酶切得到SN片段和TD片段;③转染重组质粒后可观察到红色荧光蛋白的表达.结论 3种外源片段成功载入pERFP-CI质粒; P100全长、SN片段、TD片段均可与红色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.
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绵羊CD58分子基因与载体重组及大肠杆菌转化相关性研究
目的:应用基因工程进行基因表达鉴定[1],为CD58分子辅助抗原递呈机理的研究提供理论基础.方法:通过绵羊CD58基因的基因序列设计所需引物,应用RT-PCR技术克隆绵羊CD58基因,经过克隆绵羊CD58基因与载体片段连接,制备大肠杆菌的感受态菌从而使载体片段转化至大肠杆菌中增殖培养,后分别涂布至含有IPTG、X-gal、Amp平板培养基[8].结果:未转化重组质粒的菌,不生长;未重组质粒的菌,长成蓝色菌落;转化了重组质粒的菌,长成白色菌落.结论:绵羊CD58分子基因与载体重组及大肠杆菌转化表达成功.
