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沉默激活蛋白2α诱导结肠癌HCT-116细胞对奥沙利铂的抗药性
目的 研究转录因子激活蛋白2α (Ap-2α)在结肠癌HCT-116细胞对奥沙利铂抗药性中的作用及相关机制.方法 利用脂质体介导将Ap-2 α RNA干扰质粒GV102-Ap-2 α-RNAi(实验组)及对照质粒GV102-NC(阴性对照组)转染至HCT-116细胞中；用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法与Western blot法检测实验组、阴性对照组及未处理的HCT-116空白对照组AP-2α表达情况；用CCK-8法研究HCT-116细胞增殖情况；用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 转染载有AP-2 α-RNAi序列的质粒,干扰序列1干扰后Ap-2 α mRNA与蛋白水平均下降显著.奥沙利铂处理HCT-116细胞后Ap-2α蛋白水平随作用时间延长而升高,但mRNA变化不明显；奥沙利铂作用后实验组Ap-2α蛋白水平低于阴性对照组；CCK-8法结果提示奥沙利铂处理的实验组细胞增殖水平[(88±3)％]高于奥沙利铂处理的阴性对照组[(57±3)％]与空白对照组[(73±4)％],同时流式细胞术结果表明奥沙利铂处理实验组细胞凋亡率[(15.07±1.20)％]低于奥沙利铂处理阴性对照组[(24.93±0.90)％]与空白对照组(23.71％±1.32％).结论 AP-2 α表达降低可能与结肠癌细胞对奥沙利铂的抗药性有关.
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Ku70协同激活蛋白2α促进乳腺癌基因Her-2高表达的研究
目的 探讨激活蛋白2α(activator protein 2 alpha,AP-2α)和Ku70对乳腺癌基因人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)表达的影响及意义.方法 免疫组织化学分析70例乳腺癌组织中Ku70、AP-2α与Her-2蛋白的相关性;免疫共沉淀检测Ku70和AP-2α在乳腺癌细胞中的相互作用;siRNA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-453中Ku70或/和AP-2α的表达,检测Her-2的表达及细胞增殖率变化.结果 免疫组织化学分析显示,70例乳腺癌组织中,AP-2α高表达与Her-2表达相关(r=0.9399),Ku70的表达和Her-2水平弱相关(r=0.4363),Ku70与AP-2α均高表达时与Her-2表达相关(r=0.9563).免疫共沉淀提示,Ku70和AP-2α在乳腺癌细胞中有相互作用;在基因和蛋白水平上,siRNA单独抑制AP-2α或Ku70的表达时,乳腺癌细胞Her-2 mRNA和Her-2蛋白水平下降,同时抑制Ku70和AP-2α的表达时,Her-2 mRNA和Her-2蛋白水平下降显著(P＜0.05);同时抑制Ku70和AP-2α的表达时细胞增值率明显低于单独抑制AP-2α或Ku70的表达(P＜0.01).结论 本研究表明Ku70与AP-2α存在相互作用,在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中,Ku70协同AP-2α促进乳腺癌基因Her-2高表达,抑制Ku70或/和AP-2α可显著降低乳腺癌细胞的增殖,提示Ku70和AP-2α有望成为Her-2高表达乳腺癌治疗的新靶点.
关键词： Ku70 激活蛋白2α 人表皮生长因子受体2 乳腺癌 -
AP-2α对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用研究
目的探讨核转录因子激活蛋白2α(AP-2α)对A549细胞环氧合酶2(COX-2)表达的作用.方法将AP-2α腺病毒载体转染入A549细胞,观察AP-2α对A549细胞COX-2表达及白介素1 β(IL-1 β)诱导A549细胞COX-2表达的影响.将AP-2突变质粒载体转染入A549细胞,观察AP-2突变体对IL-1 β诱导A549细胞COX-2表达的影响.用Western印迹检测COX-2蛋白的表达.结果AP-2α增加A549细胞COX-2表达及IL-1 β诱导的A549细胞COX-2表达.AP-2突变体降低IL-1 β诱导的A549细胞COX-2表达.结论AP-2 α上调A549细胞COX-2的表达.
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福尔马林致痛大鼠脊髓去甲肾上腺素能神经元及其激活蛋白2α的表达变化
目的 观察疼痛应激时,脊髓去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)能神经元的形态、分布、数量和激活蛋白2α(AP-2α)的表达变化,以探讨NA参与痛觉调制的分子机制.方法 应用免疫组化、免疫荧光双标、Western blotting和计算机图像分析方法检测福尔马林诱导致痛模型大鼠脊髓多巴胺-β-羟化酶(dopamine-β-hydroxylase, DBH)和AP-2α的表达变化.结果 正常脊髓内NA能神经元主要分布于脊髓前角,模型鼠脊髓前角、中间带和后角均出现大量深染的DBH阳性神经元,3 d时达到高峰,至第7天时DBH阳性神经元数有所下降,但仍高于正常水平.图像分析和统计学分析表明,DBH阳性神经元的数量和染色强度明显增加,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);Western blotting结果证实DBH不同时段的表达变化规律与上述形态学变化一致.AP-2α的表达变化与DBH的表达变化规律具有显著的相似性.免疫荧光双标显示DBH和AP-2α共存于脊髓神经元内.结论 在疼痛等应激状态下,脊髓前角NA能神经元内DBH表达明显增强;且中间带和后角新出现大量DBH阳性神经元,推测这些区域内一些神经元可能发生了化学性质的改变,由非NA能神经元转化为NA能神经元;而上述区域内AP-2α表达随着DBH表达增强而增加,提示NA与AP-2α在痛觉的调制和调控中发挥重要作用.
