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细胞因子诱导的凋亡抑制因子1靶向miRNA预测及其在乳腺癌耐药细胞株中的表达
目的：预测并筛选与细胞因子诱导的凋亡抑制因子1（CIAPIN1）基因3'非翻译区（3'UTR）高度匹配的目标miRNA，并初步探讨乳腺癌亲本细胞株及耐药细胞株中CIAPIN1蛋白及目标miRNA表达间的靶向关系。方法应用TargetScan、PicTarmi、miRanda数据库预测CIAPIN1基因3'UTR可能存在的种子结合位点miRNA，并根据文献筛选出目的miRNA。 Western blot法检测易成瘤的乳腺癌细胞株MCF-7、三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231、人表皮生长因子2（HER2）高表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-453及相对应的3种耐紫杉醇的乳腺癌细胞株MCF-7／Tax、MDA-MB-231／Tax、MDA-MB-453／Tax中CIAPIN1蛋白的表达情况。实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测乳腺癌亲本细胞及其耐药细胞中目的miRNA的表达情况。结果预测并筛选出目标miRNA，分别为miRNA143、miRNA571、miRNA647。Western blot法检测示，与乳腺癌亲本细胞相比，其耐药细胞中CIAPIN1蛋白相对高表达，差异有统计学意义[MCF-7／Tax比MCF-7、MDA-MB-231／Tax比MDA-MB-231、MDA-MB-453／Tax比MDA-MB-453的表达量（相对于内参GAPDH）分别为：0.80比0.21、0.70比0.31、1.00比0.35，均P＜0.05]。 PCR法检测示，与乳腺癌亲本细胞相比，耐药细胞中miRNA143、miRNA571、miRNA647相对低表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论预测并筛选出的与 CIAPIN1基因3'UTR 区存在种子结合位点的 miRNA 有miRNA143、miRNA571、miRNA647，各miRNA在耐药细胞株中低表达，而CIAPIN1蛋白相对高表达，提示这些miRNA可能通过靶向调控CIAPIN1基因参与了乳腺癌的多药耐药过程。
关键词： 乳腺肿瘤 多药耐药性 微RNA 细胞因子诱导的凋亡抑制因子1 -
miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响
目的 观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响.方法 将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体；阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞.转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量；采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50).采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率.结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P＜0.01).在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P＜0.01)；miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27 ±3.92) μg/mL降至(1.50 ±0.43) μg/mL(P ＜0.05).转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)％上升至(53.4±7.9)％(P＜0.01).结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力.
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CIAPIN1蛋白在结肠癌中的表达及其与肿瘤病理学特征的关系
目的 探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤病理学特征的关系.方法 选取我院手术后收集的结肠癌组织标本80例、癌旁组织40例,收集时间2014年1月至2017年1月.采用免疫组织化学染色、Western blotting技术检测两类标本中的CIAPIN1蛋白表达水平,并分析CIAPIN1蛋白与结肠癌发生发展的关系.结果 结肠癌组织中CIAPIN1蛋白阳性表达率(30.0％)显著低于癌旁组织(85.0％),差异有统计学意义(x2=32.303,P＜0.001).结肠癌组织中的CIAPIN1蛋白相对表达水平(0.507±0.183)显著低于癌旁组织(1.874±0.361),差异有统计学意义(t=22.513,P＜0.001).结肠癌组织中的CIAPIN1蛋白阳性表达率与患者年龄(x2=0.086,P=0.769)、性别(x2=0.779,P=0.377)、肿瘤浸润深度(x2=0.879,P=0.348)、肿瘤部位(x2=0.725,P=0.395)、肿瘤大小(x2=2.241,P=0.134)、分化程度(x2=1.372,P=0.241)、病理学类型(P=0.715)无关;与患者淋巴结转移(x2=10.813,P=0.001)、临床分期(x2=5.610,P=0.018)具有相关性.结论 结肠癌组织中的CIAPIN1蛋白呈显著低表达,并且与患者临床分期、淋巴结转移有关.
关键词： 结肠肿瘤 病理学 临床 细胞因子诱导的凋亡抑制因子1 -
细胞因子诱导的凋亡抑制因子1在胃癌中的表达及对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响
目的：探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1（CIAPIN1）在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达及对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学方法检测CIAPIN1蛋白在15例正常胃黏膜组织、148例胃癌组织（42非转移性胃癌组织、106例转移性胃癌组织）及37例转移性淋巴结组织中的表达。建立高表达和低表达CIAPIN1的胃癌SGC-7901细胞系，通过Transwell实验比较CIAPIN1不同表达水平细胞的迁移和侵袭能力。结果 CIAPIN1在胃癌组织中的表达阳性率显著低于正常胃黏膜组织（41．2％比86．7％，P＝0．0008）；在转移性胃癌组织中的表达阳性率明显低于非转移性胃癌组织（34．9％比71．4％，P＝0．0000）；在TNM分期较早组织中表达的阳性率明显高于分期较晚者（Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期分别为55．0％、53．5％和24．4％，P＝0．0037）；而转移性胃癌组织和转移性淋巴结组织中CIAPIN1表达阳性率的差异无统计学意义（34．9％比21．6％，P＝0．3700）。Transwell实验结果显示，与普通胃癌SGC-7901细胞相比，高表达CIAPIN1可显著抑制细胞迁移和侵袭，而低表达CIAPIN1可显著促进细胞的迁移和侵袭（均P＜0．05）。结论 CIAPIN1在胃癌组织中表达阳性率低，可抑制胃癌的迁移和侵袭。
关键词： 胃肿瘤 细胞因子诱导的凋亡抑制因子1 侵袭 迁移
