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CUGBP1基因对EGCG诱导人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用研究
目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡影响及与CUGBP1表达的关系.方法:MTT法检测不同剂量EGCG对A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化和蛋白质印迹法检测各处理组CUGBP1蛋白的表达;Real-Time PCR对CUGBP1 mRNA表达进行定量分析.结果:EGCG显著抑制A549细胞增殖活性,F=1 096.65,P＜0.001;EGCG孵育4和24 h A549细胞的凋亡率分别为(34.10±1.10)％和(51.62±1.50)％,较4和24 h正常对照组的(3.90±0.97)％和(1.53±1.11)％明显增加,差异有统计学意义,F=1 254.28,P＜0.001.A549细胞细胞核和细胞质内CUGBP1蛋白表达呈阳性,EGCG孵育4h可见A549细胞核CUGBP1蛋白表达呈阴性;孵育24 h,部分A549细胞变圆、核固缩,CUGBP1蛋白表达又呈阳性.CUGBP1 mRNA定量分析可见,EGCG明显抑制CUGBP1表达,EGCG孵育24 h,A549细胞中CUGBP1 mRNA相对表达量为(0.71±0.076),较4h的(0.40±0.017)高,差异有统计学意义,t=-6.782,P=0.020.结论:EGCG干扰CUG-BP1基因表达抑制人肺癌细胞株A549的增殖,可能是EGCG促进A549细胞凋亡的途径之一.
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EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞凋亡及CUGBP1蛋白表达的影响
目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对炎性刺激的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及与CUGBP1表达的关系.方法:MTT法检测EGCG和LPS刺激A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞内CUGBP1蛋白的表达.结果:与对照组相比,LPS体外显著促进A549细胞增殖,其胞核胞质内CUGBP1表达明显增强(P＜0.01).加入EGCG可拮抗LPS促A549细胞增殖的作用,促进其凋亡,明显抑制LPS刺激的A549细胞内CUGBP1的表达(P＜0.01).CUGBP1蛋白定量分析可知EGCG和LPS共同孵育A549细胞4h、24h时,细胞中的CUGBP1蛋白表达量较单纯LPS作用时降低.但EGCG和LPS共同孵育A549细胞24h,A549细胞中胞核CUGBP1蛋白表达量(1210.565± 3.46)较4h时胞核CUGBP1蛋白表达量(67.344± 3.68)高,差异有统计学意义(t=927.164,P＜0.001).结论:EGCG可能通过干扰CUGBP1基因的表达抑制炎症刺激人肺腺癌细胞A549的增殖,促进其凋亡.
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CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达
目的 比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系.方法 以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点.结果 CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％ 以上的癌巢细胞CUGBP1基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性(t'=100.01,P＜0.001).95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性(t=407.53,P＜0.001).结论 CUGBP1基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBP1基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标.
关键词： 肺肿瘤 人肺腺癌细胞株A549 基因 CUGBP1 脂多糖类 -
LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响
目的 观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响.方法 应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs.采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择佳刺激浓度.应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响.结果 不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用为明显.免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1～481.8,P＜0.01).Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1～1 531.0,P＜0.01).结论 炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖.长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达.
