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组蛋白H2AX磷酸化与肿瘤放疗敏感性关系的研究进展
目的:总结国内外关于组蛋白H2AX磷酸化与肿瘤放疗敏感性关系的研究现状.方法:应用检索Medline及维普期刊全文数据库检索系统,以"组蛋白、H2AX、磷酸化、DNA修复、肿瘤、放疗和敏感性"等为关键词,检索2000-01～2007-08相关组蛋白H2AX与放疗敏感性方面的文献.资料选择:对资料进行初选,组蛋白H2AX的生物学功能与肿瘤放疗敏感性的关系等方面的文献.纳入标准: 1)关于组蛋白H2AX的生物学功能的研究.2)关于组蛋白H2AX磷酸化可以指示放疗敏感性的研究.3)关于组蛋白H2AX磷酸化与提高放疗敏感性的研究.资料提炼:粗选有百余篇关于组蛋白H2AX方面的文章,根据纳入标准,精选50篇文献,后纳入分析24篇文献.结果:组蛋白H2AX在DNA发生双链断裂损伤时发生磷酸化,磷酸化的H2AX参与DNA损伤修复和维持基因组稳定性;由于γ-H2AX的数量与DNA损伤的数量存在一一对应的关系,因此,γ-H2AX可以作为低剂量电离辐射后衡量肿瘤放疗敏感性的指示器;通过抑制H2AX上游的激酶阻止H2AX被磷酸化,或直接抑制γ-H2AX在DNA修复进程中的功能,或应用潜在的电离辐射致敏荆,可以延长电离辐射后γ-H2AX的持续时间,增加未被修复的DNA损伤的数量.从而促进肿瘤放疗的有效性.结论:组蛋白H2AX可以作为肿瘤放疗敏感性潜在的靶分子,为提高肿瘤放射治疗疗效提供了新途径.
关键词： DNA损伤/辐射效应 组蛋白类/分析 综述文献 -
红芪多糖联合X线对HepG-2细胞DNA损伤的影响
目的 研究红芪多糖联合X线对人肝癌体外培养的HepG-2细胞DNA损伤的影响,并初步探讨其抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法 体外培养HepG-2细胞,加不同浓度的红芪多糖处理12、24、36、48小时后,CCK-8法测定细胞的生长抑制率；用单细胞凝胶电泳技术观察红芪多糖联合直线加速器发射的6MV X线辐照HepG-2细胞后,其DNA的损伤情况.结果 HPS(5 ～ 100 mg/L)可抑制HepG-2细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性；单细胞凝胶电泳法显示浓度为25 mg/L HPS作用12小时后可见明显的彗星状拖尾,而对照组细胞呈明显的圆形；HPS作用12小时后,进行2 Gy的X线照射后可见更加明显的彗星状拖尾,而对照组细胞呈明显的圆形；而2 Gy的X线照射后,再给予浓度为25 mg/L的HPS作用,亦见更加明显的彗星状拖尾,而对照组细胞呈明显的圆形；经HPS联合X线处理后的HepG-2细胞,其DNA损伤程度与单用HPS处理的细胞的DNA损伤程度相当,但优于单用X线处理；X线辐照后,立即给予HPS处理,HepG-2细胞的DNA损伤程度优于单用X线、单用HPS及HPS联合X线处理.结论 HPS可抑制HepG-2细胞的增殖；HPS和(或)X线可对HepG-2细胞的DNA造成显著的损伤；HPS可增敏X线损伤HepG-2细胞；HPS抑制HepG-2细胞损伤的DNA双链的修复可能是其增敏X线治疗肿瘤的机制之一.
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ATM与辐射激活的磷酸化P53、P21蛋白的相互作用
背景与目的:ATM基因属于PI-3K激酶家族成员,其编码蛋白具有调控DNA修复过程和调整细胞周期关卡的功能.毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者AT细胞中ATM基因的突变导致了辐射诱发的P53、P21磷酸化缺失,说明辐射激活ATM基因可调控P53、P21的磷酸化.本实验利用免疫共沉淀及Western blot技术来研究辐射激活的ATM基因与p53的关系,并观察ATM基因是否不通过P53而直接调控P21的磷酸化.方法:利用电穿孔技术将含有ATM基因cDNA的真核表达载体pEBS7-YZ5转染到AT细胞中,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATM cDNA的转录以进一步验证;在ATM稳定表达的AT细胞中,利用免疫共沉淀及Western blot技术研究ATM基因与p53基因的相互关系;以K562细胞(p53突变)为p53突变细胞模型,研究ATM是否直接磷酸化P21.结果:pEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATMcDNA片段;ATM稳定表达的AT细胞株在电离辐射诱导下,P53被磷酸化,免疫共沉淀显示ATM与P53相互作用;K562细胞经60Co γ射线照射后,P21被磷酸化,ATM抗体免疫共沉淀物中检测到P21蛋白的存在.结论:细胞遭受电离辐射作用后所激活的ATM激酶,可通过磷酸化P53继而活化细胞周期检控点P21蛋白,也可在电离辐射导致DNA损伤早期直接磷酸化P21蛋白,来启动DNA修复机制.
