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条件免疫反应对小鼠支气管哮喘的作用机制研究
目的 探讨条件免疫反应对小鼠支气管哮喘的机制.方法 选4～6周龄的雌性BALB/C小鼠,用卵清蛋白(OVA)腹膜下注射致敏,OVA雾化吸入激发,建立支气管哮喘模型,健康对照组用磷酸盐缓冲溶液进行相同操作.将模型小鼠随机分为7组,每组15只:(1)条件免疫反应1组(CIRt)组,以声音为条件刺激,布地奈德加沙丁胺醇雾化吸人为非条件刺激,两者结合7次(7 d)后可建立条件免疫反应,此后每日再现条件刺激,每周条件刺激再与非条件刺激结合1次,共20周;(2)CIR2组,以糖精水为条件刺激,其余操作同CIR1组;(3)常规治疗组,给予布地奈德和沙丁胺醇雾化吸入治疗,1次/d,共20周;(4)常规治疗减量组,给予布地奈德和沙丁胺醇雾化吸入,1次/d,共7d,之后1次/周,共20周;(5)单纯声音刺激组,单纯给声音刺激20周;(6)单纯糖精水刺激组,单纯给糖精水刺激20周;(7)空白对照组,PBS雾化吸入20周.以上7组每天给予哮喘激发1次,各治疗组在治疗间隔1 h以后给予激发;(8)健康对照组,用PBS激发20周.治疗20周后,分离小鼠脾脏单个核细胞,加入CIM+磁珠,利用分选器、分离柱分选出CD4+T淋巴细胞,经PMA、离子霉素和莫能霉素刺激培养6 h后,流式细胞技术检测CD4+T细胞胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体a7(nAChRa7)与胞浆内IL-4、IFN-γ及IL-17表达量,分析nAChRa7与IL-4、IFN-γ及IL-17的相关性.结果 (1)CIR1组(8.7 ±1.2)、CIR2组(9.1±1.0)、常规治疗组(8.4±1.1)及健康对照组(0.8±0.7)比空白对照组(16.2±1.3)肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞占白细胞的百分数均明显减少(P＜0.01),在CIR1组、CIR2组及常规治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(2)CIR1组、CIR2组、常规治疗组及健康对照组与空白对照组相比较,CD4+T淋巴细胞表达nAChRot7、IL-4及IL-17明显降低(P＜0.01),IFN-γ增高(P＜0.01);除nAChRa7外其他各因子在CIR1组、CIR2组及常规治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).nAChRa7与IL-4表达呈正相关(r=0.76,P＜0.01),与IL-17呈正相关(r=0.46,P＜0.01),与IFN-γ表达呈负相关(r=0.69,P＜0.01).(3)常规治疗减量组、单纯声音刺激组、单纯糖精水刺激组及空白对照组与健康对照组相比,气道上皮增厚,管腔狭窄,管壁周围有大量炎症细胞浸润,胶原纤维显著增多;CIR1组、CIR2组及常规治疗组经治疗后气道上皮及炎性浸润情况明显改善,胶原纤维减少.结论 以声音或糖精水为条件刺激,以布地奈德加沙丁胺醇雾化吸入为非条件刺激建立起的条件免疫反应,可以通过下调CIN+T淋巴细胞上nChRa7的表达,调节CD4+T淋巴细胞的免疫功能.
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记忆性CD4+T淋巴细胞对小鼠腹腔移植心脏排斥反应的影响
目的 探讨记忆性CD4+T淋巴细胞对来自同一抗原特异性移植心脏急性排斥反应的影响.方法 将C57BL/6小鼠的皮肤移植给Balb/c小鼠,使其致敏,3个月后,取受者的脾脏,应用小鼠记忆性CD4+T淋巴细胞纯化试剂盒纯化记忆性CD4+T淋巴细胞.同时取未进行皮肤移植的Balb/c小鼠,同法获取非致敏CD4+T淋巴细胞.以C57BL/6小鼠为供者,正常Balb/c小鼠为受者,行腹腔心脏移植,移植前3周,实验组受者经阴茎背静脉注射记忆性CD4+T淋巴细胞;非致敏对照组受者经阴茎背静脉注射非致敏CD4+T淋巴细胞;空白对照组不注射任何T淋巴细胞.各组均于移植前1 d、移植当天及移植后1 d给予环孢素A.术后记录移植心脏存活时间;取移植心脏,进行病理学观察.结果 实验组、非致敏对照组和空白对照组移植心脏存活时间分别为(8.5±1.5)d、(25.7±5.5)d和(21.2±9.2)d,实验组明显短于另两组(P<0.05).移植心脏急性排斥反应的病理学分级,实验组为3.43±0.68,非致敏对照组为1.29±0.46,空白对照组为1.31±0.49,实验组病理学分级明显高于非致敏对照组和空白对照组(P<(0.05).结论 当记忆性CIN+T淋巴细胞再次接触同一抗原特异性的移植心脏时,可促进急性排斥反应的发生,且对常规剂量的环孢素A不敏感.
关键词： CIN阳性T淋巴细胞 心脏移植 移植物排斥 小鼠
