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诱导立体网架上成纤维细胞表达成骨表型及其机制的研究
目的探讨诱导条件下的成纤维细胞在三维结构的聚乙醇酸(PGA)网架上表达成骨表型的可行性,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对成纤维细胞骨形态发生蛋白(BMP)受体表型表达的影响.方法分离、纯化人皮肤成纤维细胞,实验用第2代细胞:(1)种植成纤维细胞于PGA网架上,进行体外旋转培养,并用含TNF-α(50 U/ml)和BMP-2(0.1 μg/ml)的条件培养液进行诱导.于1 d,3、6周后利用倒置相差显微镜、扫描电镜、四环素荧光标记、茜素红染色方法观察细胞生长、骨样组织形成和矿化物沉积情况.上清液生化检测分析成骨性标志物分泌情况;(2)接种成纤维细胞于预置玻片或75 cm2 培养瓶中,用含TNF-α(50 U/ml)的条件培养液进行一次性或连续性干预,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术,于2、4、6、8 d后分别检测BMPⅠ型受体(BMPR-ⅠA和BMPR-ⅠB) mRNA 表达及蛋白形成状况.结果诱导3周后三维网架上的成纤维细胞表达成骨表型,分泌成骨细胞特征性标志物:骨钙素(OCN)和骨特异性碱性磷酸酶(B-AKP);分泌大量细胞外基质形成骨样组织;平面培养发现,TNF-α(50 U/ml)连续干预8 d可增高BMPR-ⅠB的mRNA表达和蛋白合成.结论三维立体网架上的成纤维细胞在诱导条件下能够向成骨型细胞转化,形成骨样组织,有希望作为一种新的成骨型细胞的种子细胞源;TNF-α为BMP-2的靶向作用提供条件,TNF-α和BMP-2联合应用是调节成纤维细胞表型转化的诱导条件之一.
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核基质结合区结合蛋白质1研究进展
在真核生物的细胞核中,存在一种主要由非组蛋白的纤维蛋白和大分子量的RNA组成的三维网架体系,这就是核基质.结合在核基质上的特异DNA序列称为核基质结合区(MAR),MAR常常作为边界元件出现在转录单位的两侧以及像增强子这样的调节序列附近,大小在200 bp到几个kb之间,通常为500 bp左右[1].MAR是真核生物基因组的DNA序列中能特异地和核基质紧密结合的区域.
