首页 > 文献资料
-
维甲酸诱导和生精小管重构促使小鼠诱导多能干细胞向雄性生殖细胞分化的实验研究
目的 探讨体外维甲酸联合异位重构生精小管诱导小鼠诱导多能干细胞(iPSCs)向雄性生殖细胞分化的潜能. 方法 自2010年12月至2011年12月,采用悬浮法培养小鼠iPSCs形成类胚体.类胚体培养至第5天,添加维甲酸进行诱导,不添加维甲酸的类胚体自发分化组作为对照组.收集培养10d的类胚体,采用实时定量PCR和免疫细胞化学检测其生精细胞相关基因和蛋白的表达.同时将类胚体消化为单细胞,与新生小鼠睾丸细胞混合注入雄性裸鼠皮下,移植完成后裸鼠行手术去势,移植后第4、6、8、12周取移植物进行HE染色和免疫组织化学染色. 结果 小鼠iPSCs经类胚体形成及维甲酸诱导后Stra8、Odf2、Act和Prm1基因的相对表达量上调,分别为对照组的(4.50±1.02)、(1.48±0.04)、(10.52±0.25)和(323.28±25.64)倍;Oct-4、Dppa3、Piwil2、Tex14和Scp3基因相对表达量下调,分别为对照组的0.56±0.02、0.11±0.01、0.50±0.01、0.53±0.14和0.16±0.00.类胚体同时表达雄性生殖细胞相关蛋白VASA和联合复合体蛋白3.HE染色发现,iPSCs来源生精细胞和新生小鼠的睾丸细胞共移植后能重构成类生精小管.免疫荧光染色结果显示,类生精小管管腔内可见由iPSCs分化而来的VASA阳性生精细胞. 结论 小鼠iPSCs经类胚体形成和维甲酸诱导后可分化为雄性生殖细胞.部分iPSCs来源的生精细胞可定居于类睾丸生精小管的基底膜,异位重构的生精小管可为iPSCs向雄性生殖细胞分化提供适宜的微环境.
-
小鼠睾丸消化细胞异体移植重构生精小管的研究
目的:采用免疫缺陷小鼠作为受体,通过对小鼠睾丸消化细胞异位移植后不同时期移植物的研究,观察生精小管重构、生精细胞归巢及精予发生情况.方法:取新生ICR小鼠的睾丸消化成单细胞悬液,将其与Matrigel基质胶混匀后移植于雄性裸鼠背部皮下,术后裸鼠行去势.移植后分别于4、6、8、10周处死5只裸鼠,计算移植成功率,取移植物测量直径,并进行HE染色和免疫组化检测,观察生精小管的重构、生精细胞归巢及精子发生情况.结果:20只受体鼠接受睾丸消化细胞移植后全部存活.睾丸消化细胞移植后10周内可见明显隆超的包块,包块直径由第4周的(3.91±0.71) mm增加到(6.69 ±0.50)nn,移植物表面有血管生成.对移植物石蜡切片进行HE染色可见生精小管样结构,部分生精小管管腔内可见由精原细胞发育至精子细胞的各级生殖细胞,未见明显精予产生.对8周移植物进行免疫组化观察,可见生殖细胞标志物Mvh、支持细胞标志物Gata4和间质细胞标志物P450Scc表达.结论:新生小鼠睾丸消化细胞移植于裸鼠背部皮下后可重可生精小管,为研究睾丸组织工程及睾丸发育和精子发生过程中睾丸各组成细胞之间的相互作用提供了理想的研究模型.
