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miR-10b在肝癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-10b在肝癌组织中的表达及其临床意义.方法 选择58例(病理证实手术时发生转移32例,未转移26例)肝癌组织和10例正常肝组织标本.qRT-PCR法检测miR-10b表达,分析miR-10b表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 转移组与非转移组肝癌组织中miR-10b表达水平均有一定程度的上调,在转移组肝癌组织中miR-10b表达水平上调程度尤为明显(P＜0.05).miR-10b表达与转移(P＜0.01)、AJCC分期(P=0.016)明显相关,而与年龄、性别、乙肝、肝硬化、肿瘤大小及分化无明显相关.肝癌组织miR-10b高表达的患者5年生存率明显低于低表达患者(P＜0.01),miR-10b高表达是影响肝癌患者总体生存的独立风险因素(P=0.016).结论 miR-10b在肝癌组织尤其是转移的肝癌组织中表达明显上调,可能参与了肝癌的发展过程,有望成为一种新的肝癌预后参考指标.
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微小RNA-10b对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-10b对入胰腺癌细胞AsPC-1细胞(AsPC-1)增殖凋亡的影响.方法 重组真核表达载体pPG-CMV-EGFP-miR-10b(实验组)及空载体(对照组)转染AsPC-1细胞株.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光显微镜检测载体瞬时表达的效率;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测不同组间细胞的凋亡;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族促凋亡调节蛋白(Bim)、髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达.结果 与对照组(0.002 529±0.000 339)比较,实验组miR-10b表达量(0.020 500±0.007700)增加10倍,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞生长曲线提示,实验组细胞增殖活性较对照组增高24％,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组细胞凋亡率为3.0％,对照组为10.1％,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组细胞Bim蛋白的相对表达水平(0.256 ±0.012)低于对照组(0.652±0.042),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组细胞MCL-t蛋白的相对表达水平(0.515±0.025)高于对照组(0.154 ±0.068),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-10b过表达可调控胰腺癌细胞Bim、MCL-1蛋白的表达,促进细胞增殖,抑制凋亡.
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微小RNA-10b在不同分化程度胃癌细胞株中的表达
目的 观察微小RNA-10b(miR-10b)在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达水平.方法 选择5种胃癌细胞株,根据其不同分化程度分为3组,即高分化组(AGS)、中分化组(N87、SGC-7901)、低分化组(MKN-45、BGC-823),以胃黏膜上皮永生化细胞GES-1为第4组,即正常组,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光素酶报告基因定量检测,观察miR-10b在6种不同分化水平的细胞株中的表达.结果 miR-10b在正常组及高分化组中几乎不存在表达,设定其在GES-1中的表达量为1.0,高分化组相对表达量为2.5,中分化组弱表达,相对表达量为7.5、7.0,在包括BGC-823、MKN45这种具有高度转移倾向的低分化组中明显高表达,相对表达量为10.5、12.5.结论 miR-10b在低分化胃癌细胞株中过表达,同时其表达水平与胃癌细胞侵袭转移能力呈正相关.
关键词： 胃癌细胞株 微小RNA-10b 实时定量聚合酶链反应 -
微小RNA-10b对胶质瘤细胞增殖能力的影响
目的 观察微小RNA-10b(miR-l0b)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖能力的影响.方法 利用TaqMan@实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测77例不同级别胶质瘤组织、15例正常脑组织及胶质瘤细胞株中miR-10b的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测转染miR-10b模拟物对胶质瘤A172细胞增殖能力及细胞周期分布的影响.结果 miR-10b在胶质瘤细胞和胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常脑组织(4.46 ±0.24比0.44±0.10,P＜0.01),且miR-10b的表达水平与胶质瘤组织病理分级呈正相关(Ⅰ级:2.10 ±0.27,Ⅱ级:3.58±0.35、Ⅲ级:4.85±0.38、Ⅳ级:6.38±0.37,P＜0.01).过表达miR-10b能够促进A172细胞的体外增殖能力,并使A172细胞处于Go/G1期的细胞减少,进入S期的细胞明显增多.结论 miR-10b在胶质瘤中过表达,加速胶质瘤细胞进入S期,促进增殖.
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微小RNA-1Ob沉默抑制胰腺癌细胞表达过氧化物酶增殖体激活受体-α
目的 观察微小RNA(miR)-10b沉默对人胰腺癌细胞AsPC-1细胞(以下简称AsPC-1)表达过氧化物酶增殖体激活受体-α蛋白(PPAR-α)的影响.方法 以脂质体转染法将重组反义真核表达载体pPG-CMV-EGFP-miR-10b转染AsPC-1细胞株,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光显微镜检测载体瞬时表达的效率,细胞增殖实验评价不同组间细胞增殖能力的差异;Western blot 检测细胞PPAR-α蛋白的表达.结果 转染反义组miR-10b减少至对照组的14％.细胞增殖减少至对照组的36％,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞PPAR-α蛋白的表达水平:反义组1 230.5±110.4,对照组2 398.1±156.3和2 603.7±227.5,反义组与对照组差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡实验:反义组凋亡率为19.4％,对照组凋亡率为10.1％和11.5％.结果提示反义组细胞的凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-10b沉默可抑制胰腺癌细胞PPAR-α蛋白的表达,并抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡.
关键词： 胰腺癌 微小RNA-10b 过氧化物酶增殖体激活受体-α -
微小RNA-10b在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨胃癌组织和癌旁组织中微小RNA(miR)-10b的表达差异及其临床意义.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测78例胃癌患者手术切除癌组织及配对癌旁组织标本中miR-10b的表达水平.结果 miR-10b在胃癌组织中的相对表达水平(6.758±2.301)显著高于其在配对癌旁组织中的表达(8.516±1.870),差异有统计学意义(P＜0.01).胃癌组织中miR-10b的表达水平与临床TNM分期(P＜0.01)、肿瘤大小(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.01)以及肿瘤浸润深度(P＜0.01)密切相关,而与年龄、性别、分化程度无明显相关(P＞0.05).结论 胃癌组织中miR-10b的高表达可能与胃癌的发生、发展、侵袭、转移相关.
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微小RNA-10b对人胰腺癌细胞RhoC表达的影响
目的 观察微小RNA(miR)-10b对人胰腺癌细胞AsPC-1细胞(以下简称AsPC-1)表达RhoC蛋白的影响.方法 以脂质体转染法将重组正、反义真核表达载体pPG-CMV-增强绿色荧光蛋白(EGFP)-miR-10b转染AsPC-1细胞株(分为正、反义组),实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和荧光显微镜检测载体瞬时表达的效率,Matrigel实验评价不同组间细胞迁移侵袭能力的差异；Western blot检测细胞RhoC蛋白的表达.结果 转染正义组miR-10b表达量增加10倍,反义组减少至对照组的14％.差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞RhoC蛋白的表达水平:正义组为(95.7±8.5)像素单位；反义组为(28.5±5.7)像素单位,差异均有统计学意义(P＜0.05)；细胞移行实验:正义组移行细胞数为(85±7)个,反义组为(32±5)个,差异有统计学意义(P＜0.05)；细胞侵袭实验:正义组细胞穿膜细胞数为(35±9)个,反义组为(8±3)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-10b可促进胰腺癌细胞RhoC蛋白的表达,并影响胰腺癌细胞侵袭迁移的能力.
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微小RNA-10b靶向蛋白去乙酰化酶4调控雌激素受体阳性MCF-7乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-10b靶向蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)调控雌激素受体阳性(ER+)MCF-7乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药性.方法 建立ER+且他莫昔芬耐药的MCF-7细胞株MCF-7-TR,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测MCF-7细胞和MCF-7-TR细胞miR-10b表达水平.分别采用噻唑蓝(MTT)法和锥虫蓝法检测转染pre-miR-10b、miR-10b抑制物、siHDAC4的MCF-7细胞、MCF-7-TR细胞在不同他莫昔芬浓度下(0、5、10、15、20、30 μmol/L)的增殖能力和活性.采用Western blot检测HDAC4蛋白表达情况.结果 以MCF-7乳腺癌细胞miR-10b表达水平和侵袭能力作为标准,MCF-7-TR细胞乳腺癌细胞miR-10b表达水平和侵袭能力较MCF-7乳腺癌细胞分别为7.2±1.1和5.3±1.3.随着他莫昔芬浓度增加,各细胞增殖率均呈下降趋势,其中以MCF-7细胞为明显,其次为MCF-7-TR+ miR-10b抑制物+siHDAC4细胞以及MCF-7+ pre-miR-10b+ HDAC4细胞,而MCF-7-TR+ siHDAC4细胞和MCF-7-TR细胞增殖率下降程度低.MCF-7细胞和MCF-7-TR+miR-10b抑制物细胞的迁移能力下降多,而MCF-7+pre-miR-10b+他莫昔芬(10 μmol/L)细胞和MCF-7-TR+他莫昔芬(10 μmol/L)细胞的迁移能力比较差异无统计学意义(t=1.116,P=0.272),但显著高于MCF-7细胞和MCF-7-TR+ miR-10b抑制物细胞(t=0.124、10.769、14.569、11.577,P均为0.000).MCF-7+ pre-miR-10b细胞HDAC4蛋白表达水平低于MCF-7细胞,MCF-7-TR细胞HDAC4蛋白表达水平MCF-7-TR+ miR-10b抑制物细胞,MCF-7+ siHDAC4细胞HDAC4蛋白表达水平低于MCF-7细胞.结论 miR-10b-HDAC4信号通路可能作为乳腺癌他莫昔芬耐药的一种分子机制.
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微小RNA-10b沉默对人三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响及其机制
目的 观察微小RNA-10b(miR-10b)沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响,并探讨其机制.方法 用人工合成的miR-10b inhibitor转染MDA-MB-231细胞,同时设空白细胞组和无义序列转染组为对照组,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后miR-10b的表达,以检验沉默效果.CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭实验分析细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力变化.Real-time PCR和Western blot法分别检测T淋巴细胞侵袭转移诱导因子1(TIAMl) mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组比较,miR-10b inhibitor转染组的2-△△Ct值(0.26±0.01)明显下调(P＜0.01),表明成功沉默miR-10b的表达.miR-10b沉默后,48 h和72 h细胞增殖率分别为(409.10 ±8.38)％和(610.70±17.59)％,均明显上调(P＜0.01),增殖效应在48 h之后出现,并一直维持到72 h;早期和晚期细胞凋亡比例分别为1.77％和1.61％,均明显下调(P＜0.05);穿过基质膜的侵袭和迁移细胞数分别为(212.17±13.57)个和(322.67±8.62)个,均明显上调(P＜0.01).TIAM1基因在mRNA水平变化不大(P＞0.05),在蛋白水平表达上调(P＜0.05).结论 miR-10b沉默可以促进MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭和迁移,并抑制凋亡,其机制可能与miR-10b沉默后在转录后水平上调TIAM1蛋白的表达有关.
关键词： 三阴性乳腺癌 微小RNA-10b T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1 侵袭 -
miR-10b对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭功能的影响
目的:研究人微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭力的影响.方法:通过化学方法合成成熟型人miR-10b,以脂质体包裹miR-10b并转染JEG-3细胞为miR-10b转染组,无关序列转染组及空白转染组分别为阴性对照组与空白对照组;RT-PCR检测各组miR-10b的表达.应用Transwell chamber法检测各组细胞侵袭能力的差别.结果:RT-PCR结果提示miR-10b转染组miR-10b的表达量与阴性对照组和空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell chamber法检测miR-10b转染组细胞的侵袭率与阴性对照组、空白对照组相比均有升高,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组与空白对照组的侵袭率差异无统计学意义(P>0.05).结论:miR-10b能显著上调JEG-3细胞的侵袭力,有望作为滋养细胞疾病的治疗靶点.
