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微小RNA-10b靶向蛋白去乙酰化酶4调控雌激素受体阳性MCF-7乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-10b靶向蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)调控雌激素受体阳性(ER+)MCF-7乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药性.方法 建立ER+且他莫昔芬耐药的MCF-7细胞株MCF-7-TR,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测MCF-7细胞和MCF-7-TR细胞miR-10b表达水平.分别采用噻唑蓝(MTT)法和锥虫蓝法检测转染pre-miR-10b、miR-10b抑制物、siHDAC4的MCF-7细胞、MCF-7-TR细胞在不同他莫昔芬浓度下(0、5、10、15、20、30 μmol/L)的增殖能力和活性.采用Western blot检测HDAC4蛋白表达情况.结果 以MCF-7乳腺癌细胞miR-10b表达水平和侵袭能力作为标准,MCF-7-TR细胞乳腺癌细胞miR-10b表达水平和侵袭能力较MCF-7乳腺癌细胞分别为7.2±1.1和5.3±1.3.随着他莫昔芬浓度增加,各细胞增殖率均呈下降趋势,其中以MCF-7细胞为明显,其次为MCF-7-TR+ miR-10b抑制物+siHDAC4细胞以及MCF-7+ pre-miR-10b+ HDAC4细胞,而MCF-7-TR+ siHDAC4细胞和MCF-7-TR细胞增殖率下降程度低.MCF-7细胞和MCF-7-TR+miR-10b抑制物细胞的迁移能力下降多,而MCF-7+pre-miR-10b+他莫昔芬(10 μmol/L)细胞和MCF-7-TR+他莫昔芬(10 μmol/L)细胞的迁移能力比较差异无统计学意义(t=1.116,P=0.272),但显著高于MCF-7细胞和MCF-7-TR+ miR-10b抑制物细胞(t=0.124、10.769、14.569、11.577,P均为0.000).MCF-7+ pre-miR-10b细胞HDAC4蛋白表达水平低于MCF-7细胞,MCF-7-TR细胞HDAC4蛋白表达水平MCF-7-TR+ miR-10b抑制物细胞,MCF-7+ siHDAC4细胞HDAC4蛋白表达水平低于MCF-7细胞.结论 miR-10b-HDAC4信号通路可能作为乳腺癌他莫昔芬耐药的一种分子机制.
