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Wnt3A基因沉默对腭突间充质细胞增殖与凋亡影响
目的:应用RNA干扰技术,研究WNT3A基因突变导致腭裂发生的机制。方法:构建WNT3A基因沉默载体,对胚胎腭突间充质细胞进行RNA 干扰实验。 CCK-8检测细胞活力检测WNT3A基因沉默后细胞增殖的改变, Hoechst 染色检测WNT3A因沉默后对胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响。结果:WNT3A基因表达下调后,腭突间充质细胞的增殖速度明显减慢,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);实验组的凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。结论:WNT3A基因表达下调后,腭突间充质细胞增殖减弱并发生凋亡,本研究从细胞水平解释了流行病学调查发现的WNT3 A 基因功能下调与先天性唇腭裂发生之间的密切关联的病因。
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MTHFR基因沉默对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响
目的:应用RNA干扰技术,从细胞水平研究5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因突变导致腭裂发生的机制.方法:构建MTHFR基因沉默载体,对13天胚胎的腭突间充质细胞进行RNA干扰实验.MTT法检测MTHFR基因沉默后细胞增殖的改变.流式细胞仪检测MTHFR基因沉默后对胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响.实验结果采用SPSS11.0软件包进行分析,细胞增殖的比较用重复测量方差分析,凋亡率检测应用U检验.结果:MTHFR基因表达下调后,在无叶酸存在的情况下,腭突间充质细胞的增殖速度明显减慢,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);实验组的凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:在外源性叶酸补充不足的情况下,腭突间充质细胞增殖减弱并发生凋亡,这可能是MTHFR基因突变与先天性唇腭裂发生相关的病理学基础.