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β羟丁酸对阿尔茨海默病模型细胞神经营养因子受体p75表达的影响及机制探讨
目的 探讨β羟丁酸对阿尔茨海默病(AD)模型细胞神经营养因子受体p75(p75NTR)的调控及其机制. 方法 以终浓度为5 mmol/L β羟丁酸对体外培养SH-SY5Y细胞预处理,再加入Aβ(终浓度为10、20、40、80 μmol/L),同时设立对照组和单纯Aβ处理组,24 h后收集细胞,采用MTT法测定各组细胞活力.其次,将培养的细胞分为4组,单纯β羟丁酸组和β羟丁酸干预组细胞以终浓度为5 mmol/Lβ羟丁酸预处理,再向Aβ处理组和β羟丁酸干预组细胞加入终浓度为20μmol/L Aβ,对照组仅加入培养液,6h、24 h后收集细胞,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞中神经营养因子受体p75(p75NTR)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、HDAC2 mRNA及其蛋白表达水平以及p65蛋白表达水平.后,以小干扰RNA(siRNA)沉默HDAC1/2,分析细胞p75NTR mRNA及蛋白表达水平. 结果 40、80 μmmol/L Aβ处理组细胞活力低于对照组(均P＜0.01),β羟丁酸干预组细胞活力高于Aβ处理组(P＜0.01).与对照组相比,6h、24 h单纯β羟丁酸组细胞p75NTR mRNA及蛋白、p65蛋白表达水平升高(P＜0.05),Aβ处理组细胞p75NTR mRNA及蛋白、p65蛋白表达水平降低(P＜0.01),6h单纯β羟丁酸组细胞HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.05),6h、24 h Aβ处理组细胞HDAC1/2mRNA及蛋白表达水平升高(均P＜0.01);与Aβ处理组相比,6h、24 hβ羟丁酸干预组细胞p75NTR mRNA及蛋白表达水平、p65蛋白表达水平升高(P＜0.01),HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.05).沉默HDAC1的细胞p75NTR mRNA及其蛋白表达水平升高(P＜0.05),沉默HDAC2则差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 β羟丁酸可通过抑制HDAC1,影响p75NTR表达,进而激活p65蛋白,发挥保护神经的作用.
关键词： 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白 神经营养因子受体p75 β羟丁酸盐
