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4-羟基壬烯醛引起支气管上皮细胞白细胞介素-8升高的机制及银杏内酯B的拮抗作用
目的 探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)引起人支气管上皮细胞(16HBE)前炎因子白细胞介素-8(IL-8)升高的机制,以及银杏内酯B对其的拮抗作用.方法 实验分组为4-HNE(10 μmol/L)组、银杏内酯B(100 μmoL/L)孵育+4-HNE(10μmoL/L)组和正常对照组3组,在刺激支气管上皮细胞0.5、2、4、8、12 h后,检测细胞IL-8和IL-8 mRNA的表达水平、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2、转录激活蛋白-1(AP-1)的活性;观察MAP激酶(MEK)1抑制剂PD98059阻断ERK1信号转导途径后,对4-HNE引起的AP-1结合活性和IL-8生成的影响.检测上述3个实验组AP-1的结合活性.应用方差分析和t检验进行统计学处理.结果 4-HNE组、银杏内酯B孵育+4-HNE组、正常对照组刺激细胞4 h后,细胞上清IL-8值分别为(98.3 ±4.2)、(88.2±5.3)和(65.3±6.2)μg/L;刺激12 h后细胞上清IL-8值分别为(116.5±5.6)、(102.8±4.7)和(63.7±6.6)μg/L.4-HNE组0.5、2、4、8、12 h的磷酸化ERK1水平高于对照组(t值为2.83～14.03,P均<0.05);4-HNE、银杏内酯B孵育+4-HNE组、PD98059+4-HNE组及正常对照组的AP-1结合活性差异有统计学意义(F值为21.49～194.16,P均<0.01).PD98059孵育2 h,4-HNE作用2、4、8、12 h后,IL-8表达和AP-1结合活性明显低于未用PD98059孵育4-HNE刺激组.银杏内酯B+4-HNE组AP-1结合活性低于4-HNE组.结论 4-HNE可以通过ERK1途径增强AP-1转录活性,促进支气管上皮细胞IL-8表达.而银杏内酯B可通过抑制AP-1活性,减少4-HNE引起的支气管上皮细胞IL-8的合成.
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丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β1表达
目的观察丙丁酚对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性和TGF-β1表达的作用,探讨抗氧化剂治疗脂质肾损伤的分子机制.方法大鼠系膜细胞随机分为正常细胞组、ox-LDL处理组和ox-LDL+丙丁酚处理组.运用凝胶迁移率实验检测AP-1活性变化,Western杂交检测c-Jun、JNK/SAPK磷酸化及TGF-β1蛋白表达水平的改变.运用Northern杂交检测TGF-β1 mRNA表达.结果丙丁酚50 μmol/L预处理系膜细胞20 h,显著降低ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性.丙丁酚浓度为50、100、200 μmol/L时,均显著抑制ox-LDL诱导JNK,/SAPK磷酸化;且ox-LDL+丙丁酚处理组的c-Jun蛋白表达分别为ox-LDL处理组的60%、51%和46%.Northern杂交显示:ox-LDL为10 μg/mL时并不激活TGF-β1 mRNA表达(P>0.05);而当ox-LDL浓度增至50、100 μg/mL时,TGF-β1 mRNA表达分别增加1.8和1.9倍.Western杂交显示ox-LDL呈剂量依赖方式增加TGF-β1蛋白质表达.加入丙丁酚后显著降低ox-LDL诱导系膜细胞的TGF-β1 mRNA和蛋白质表达(P<0.05).结论丙丁酚可能通过抑制JNK1/SAPK磷酸化和AP-活性下调ox-LDL诱导系膜细胞TGF-β1表达.
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α-生育酚抑制高糖诱导大鼠系膜细胞AP-1活性及TGF β1表达
目的研究α-生育酚对高糖诱导肾小球系膜细胞转录激活蛋白-1(AP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响，探讨抗氧化剂治疗糖尿病肾病的机制。方法采用凝胶迁移率实验(Gel shift assay)和超迁移率实验(Gel supershift assay)检测不同浓度及不同时间下葡萄糖对系膜细胞AP-1活性的影响、AP-1二聚体中Jun和Fos成分的变化、Western杂交检测TGF-β1蛋白表达水平以及抗氧化剂α-生育酚对上述指标的影响。结果高糖呈浓度和时间依赖性激活系膜细胞AP-1活性，AP-1二聚体中JunD、Fos参与这一作用。同时，葡萄糖增加系膜细胞TGF-β1蛋白表达。加入α-生育酚预处理系膜细胞后，葡萄糖诱导的AP-1活性和TGF-β1表达水平降低。结论α-生育酚抑制高糖诱导的系膜细胞AP-1活性及TGF-β1表达可能是其作为抗氧化剂治疗糖尿病肾病的分子机制之一。
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丙丁酚对系膜细胞转录激活蛋白-1活性的影响
目的：研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞转录激活蛋白-1(AP-1)活性的改变及抗氧化剂丙丁酚对其影响，进一步探讨丙丁酚抗氧化作用的分子机制。方法：利用凝胶迁移率实验(Gel shift as-say)和超迁移率实验(Gel supershift assay)检测不同浓度及不同时相ox-LDL对大鼠肾小球系膜细胞AP-1活性的影响、AP-1二聚体中c-Jun和c-Fcs成分的变化及抗氧化剂丙丁酚对其影响。结果：ox-LDL(100mg／L)作用系膜细胞后6h，核蛋白提取物中AP-1活性开始升高，36h达到大值，48h与36h相比较无明显变化；ox-LDL作用24h时，随着ox-LDL浓度的增加，AP-1活性逐渐增加；超迁移率实验显示ox-LDL(100mg／L)主要激活AP-1二聚体成分中c-Jun，而Fcs蛋白未激活；丙丁酚(50nmol／L)对一般培养状态下系膜细胞AP-1活性无明显抑制作用，但能明显抑制ox-LDL(100mg／L)诱导的系膜细胞AP-1活性。结论：丙丁酚降低ox-LDL诱导的系膜细胞AP-1活性可能是其作为抗氧化剂治疗动脉粥样硬化的分子机制之一。
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姜黄素防治慢性低O2高CO2大鼠肺动脉高压与c-Jun、c-Fos的关系研究
目的:研究姜黄素对慢性低O2高CO2大鼠肺动脉高压及肺动脉管壁c-Jun和c-Fos表达的影响.方法:36只SD大鼠随机分为正常对照组、低O2高CO2组、低O2高CO2+姜黄素组(简称姜黄组).采用图像分析、免疫组化和组织原位杂交技术等方法观察姜黄素对慢性低O2高CO2大鼠肺动脉压力、血管显微结构及肺动脉管壁原癌基因c-Jun和c-Fos表达影响.结果:血流动力学检测显示姜黄素组mPAP较低O2高CO2组明显降低(P＜0.01),组间mCAP比较差异无显著性.光镜下姜黄素组肺细小动脉内弹力板扭曲、中膜平滑肌细胞增生及管腔狭窄程度均明显轻于低O2高CO2组.电镜下姜黄素组大鼠肺细小动脉内皮细胞结构基本正常,中膜平滑肌细胞增生较轻,胶原少见;外膜胶原纤维较低O2高CO2大鼠明显减少.免疫组化法发现肺细小动脉c-Jun和c-Fos平均吸光度值低O2高CO2组明显高于正常对照组(P＜0.01),姜黄素组明显低于低O2高CO2组(P＜0.01);原位杂交法显示肺细小动脉管壁c-Jun mRNA平均吸光度值姜黄素组显著低于低O2高CO2 组(P＜0.01).结论:姜黄素有抑制慢性低O2高CO2性肺动脉高压和改善肺血管结构重建的作用,下调c-Fos、c-Jun及其基因的表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖可能是其重要作用机制.
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罗格列酮改善糖尿病大鼠早期肾脏病变机制的研究
目的:探讨罗格列酮对糖尿病大鼠早期肾脏病变的改善作用及其机制.方法:采用链脲菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型作为研究对象.每日给予罗格列酮5rag·kg-1、20 mg·kg-1灌胃,共4周.检测各组大鼠的血糖(BS)、血脂及24h尿白蛋白水平.随后处死大鼠,测定肾组织中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)及铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)、谷胱甘肤过氧化酶(GSH-Px)、转录激活蛋白-1(AP-1)的活性.同时留取肾脏组织作PAS染色进行病理检查.分别用逆转录-聚合酶链式反应(PT-PCR)和免疫组化法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及蛋白质的含量.结果:与糖尿病组相比,罗格列酮20 mg·kg-1干预组BS、血脂水平无明显变化,但肾脏MDA、TGF-β1mRNA及蛋白质含量明显下降,AP-1活性虽有所降低,但没有显著性差异.而肾脏抗氧化酶活性,包括SOD、GSH-Px、T-AOC则明显上升.病理检查发现该组较糖尿病组肾小球面积、体积减小.结论:罗格列酮可明显改善糖尿病大鼠的早期肾脏损害.机制可能与其抗氧化,下调TGF-β1的表达有关.
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阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨
目的研究阿司匹林对SGC-7901胃癌细胞生长的影响,并初步探讨其作用的分子机制.方法采用3H-TdR法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞DNA合成及细胞周期的影响;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2表达的影响;Western blotting法及EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c-fos表达及AP-1活化的影响.结果胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后,其3H-TdR掺入值明显降低,且与阿司匹林浓度呈高度负相关(r=-0.9, P<0.05).细胞周期分析显示,阿司匹林主要作用于胃癌细胞S期.免疫细胞化学染色显示,阿司匹林能下调胃癌细胞COX-2表达,且具有良好的量效关系.Western blotting检测表明,阿司匹林能降低胃癌细胞c-fos蛋白的表达.EMSA分析显示,阿司匹林能有效抑制血清刺激的AP-1的DNA结合活性.结论阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞c-fos表达以及AP-1活化,进而抑制COX-2表达所致.
