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小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响
目的：研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶（FAS）基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法：合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA（siRNA），分别转染至人肝细胞株HepG2，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测空白对照组（HepG2细胞不经过任何处理）、阴性对照组（转染没有任何基因干扰作用的阴性siRNA）、FAS-siRNA-1转染组、FAS-siRNA-2转染组和FAS-siRNA-3转染组的FAS mRNA的表达。蛋白免疫印迹（Western blot）法检测蛋白质的表达水平，筛选出沉默效果佳的一对siRNA。将有效siRNA转染至HepG2细胞，48 h后测定细胞内外甘油三酯及总胆固醇含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果：25 nmol/L siRNA和3μl/孔（24孔板）转染试剂的转染效率高。FAS-siRNA-3对HepG2的FAS基因的沉默效果好，FAS-siRNA-3转染组的FAS在mRNA水平和蛋白水平分别降低为空白对照组的（52.33±3.07）%和（51.57±3.14）%。FAS-siRNA-3沉默FAS基因后HepG2的细胞内和细胞外培养液中甘油三酯含量显著低于空白对照组，细胞外总胆固醇含量显著低于空白对照组。与空白对照组比较，FAS-siRNA-3转染组HepG2的肝脂酶基因mRNA表达水平显著升高（P<0.0001），微粒体甘油三酯转运蛋白基因mRNA表达水平显著降低（P<0.05），差异均有统计学意义。结论：FAS基因沉默可显著降低HepG2细胞内甘油三酯、细胞外培养液甘油三酯和总胆固醇的含量，需进一步的体内外实验加以验证。
关键词： 小干扰RNA 脂肪酸合酶 人肝细胞株HepG2
