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异槲皮苷调节AMPK-TORC2磷酸化影响肝细胞糖异生的研究
目的 观察异槲皮苷对肝细胞糖异生及关键酶的影响,并探讨其影响肝细胞糖异生的机制.方法 体外培养小鼠原代肝细胞,以乳酸和丙酮酸为糖异生底物,予异槲皮苷干预、以二甲双胍阳性为对照,分为空白对照组(Con)、糖异生诱导组(GN)、40μmol/L异槲皮苷组(40IQ)、80μmol/L异槲皮苷组(80IQ)、500μmol/L二甲双胍组(Met).GOD法测定上清葡萄糖浓度,Western blot检测总AMPKα 及AMPKαThr172磷酸化、TORC2蛋白表达及Ser171磷酸化,RT-PCR检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、AMP活化的蛋白激酶(AMPK)、环腺苷酸诱导因子结合蛋白辅激活物2(TORC2)的mRNA表达水平.经AMPK抑制剂二氢脱氧吗啡预处理,观察上述条件下葡萄糖浓度、PEPCK、葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达、AMPKα、TORC2蛋白水平及其磷酸化改变.结果 80IQ组上清葡萄糖浓度较GN组降低[(124.62±24.33)vs(179.50±31.86)μmol/L,P<0.01].GN组PEPCK、G6Pase表达高于Con组和80IQ组.Western blot检测结果显示,异槲皮苷增加pThr172-AMPKα 和pSer171-TORC2蛋白水平.经二氢脱氧吗啡预处理后,80IQ组、Met组葡萄糖浓度增加[(124.62±24.33)vs(168.62±23.71)μmol/L,(111.50±25.42)vs(138.33±17.58)μmol/L,P<0.01]、PEPCK mRNA表达上调.异槲皮苷组抗磷酸化AMPKα(pT172-AMPKα)和抗磷酸化TORC2(pSer171-TORC2)蛋白表达受到抑制.结论 异槲皮苷抑制体外培养的小鼠原代肝细胞糖异生及关键酶基因转录,可能通过调节AMPK与TORC2磷酸化影响肝细胞糖异生.
