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舒林酸经survivin/Aurora B途径对人胰腺癌细胞分裂的阻断效应
目的 观察舒林酸处理胰腺癌细胞BxPC3后对survivin、Aurora B表达及细胞周期和增殖的影响,探讨舒林酸的作用机制.方法 应用MTT法检测舒林酸对BxPC3细胞的增殖抑制作用,RT-PCR法检测survivin mRNA、Aurora B mRNA的表达,Western blot法检测survivin蛋白表达及Aurora BThr-232磷酸化水平,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 舒林酸呈时间和剂量依赖性抑制BxPC3细胞增殖.经500μmoL/L舒林酸作用细胞48 h后,survivin mRNA和Aurora B mRNA表达量分别从1.56和0.66下降到0.44和0.11(P<0.01);survivin蛋白表达从1.27下降到0.21(P<0.01),Aurora BThr-232磷酸化水平从0.47下降到0.25(P<0.01);G0/G1期细胞比例从(56.65±1.93)%升高到(70.58±3.21)%(P<0.01).结论 舒林酸通过下调survivin表达,降低Aurora B的活性,从而影响染色体过客复合物蛋白(CPC)对细胞染色体的排列和分离作用,使大量细胞停滞在G0/G1期,从而抑制细胞的有丝分裂.
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宫颈癌与宫颈病变组织Aurora A和Aurora B表达与临床病理因素相关性分析
目的:探讨宫颈病变组织中Aurora A、B的表达与临床病理因素的相关性.方法:2010-09-01-2012-06-30河北医科大学第一医院门诊及住院确诊的204例宫颈病变组织,其中慢性宫颈炎40例,CIN Ⅰ 52例,CINⅡ～Ⅲ级48例,宫颈鳞状上皮细胞癌64例.采用免疫纽化法检测宫颈组织中Aurora A、B的表达,分析Aurora A、B在不同宫颈组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系.结果:Aurora A在慢性宫颈炎组、CINI组、CINⅡ～Ⅲ组及宫颈鳞癌组中的阳性表达率分别为2.50％(1/40)、11.54％(6/52)、62.50％(30/48)和78.69％(51/64),Aurora B分别为2.50％(1/40)、9.62％(5/52)、58.33％(28/48)和68.75％(44/64).Aurora A、B的阳性表达率在CINⅡ～Ⅲ组及宫颈鳞癌组明显高于慢性宫颈炎组和CINI组,P＜0.001;但在宫颈鳞癌与CINⅡ～Ⅲ中的表达差异无统计学意义,P值分别为0.070和0.255.Aurora A表达与宫颈癌的临床分期(P=0.030)、淋巴转移(P=0.040)和肿瘤细胞分化程度(P=0.009)有关,Aurora B的表达与肿瘤细胞分化程度有关,P=0.007.Aurora A、B的表达呈正相关,P＜0.001.结论:Aurora A和AuroraB表达与宫颈癌的发生、发展密切相关,有望成为宫颈癌早期诊断、治疗的生物学指标.
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低浓度紫杉醇诱导卵巢癌SKOV3细胞有丝分裂阻滞及细胞凋亡的机制研究
目的:研究低浓度紫杉醇对卵巢癌SKOV3细胞有丝分裂状态及细胞凋亡的影响及相关机制.方法:将AuroraB siRNA转染至SKOV3细胞,同时设置空白对照组及阴性对照组,通过蛋白质印迹法检测Aurora B蛋白表达.转染48 h后,用低浓度紫杉醇(100nmol/L)处理各组细胞24h,用流式细胞仪检测各组细胞有丝分裂指数的变化,通过免疫荧光染色观察各组细胞有丝分裂改变和细胞骨架形态改变.同时用100nmol/L紫杉醇处理各组细胞72 h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡.结果:将终浓度100 nmol/L Aurora B siRNA转染实验组SKOV3细胞后,Aurora B蛋白的表达相对于空白和阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).转染48 h后,使用低浓度紫杉醇(100 nmol/L)处理细胞24h,相对于空白和阴性对照组,实验组有丝分裂指数明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).通过分裂期标志蛋白p-H3对各组细胞进行免疫荧光检测,实验组的p-H3阳性细胞比例降低,与空白和阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).通过细胞骨架蛋白α-tubulin对3组细胞进行免疫荧光染色检测,实验组出现圆形细胞骨架结构及浓缩核结构的细胞比例明显低于空白和阴性对照组,且差异均有统计学意义(P＜0.01).转染48 h后,采用低浓度紫杉醇(100 nmol/L)处理各组细胞72 h,与空白和阴性对照组相比,实验组细胞凋亡比例降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:Aurora B的表达下调可以降低低浓度紫杉醇对SKOV3细胞有丝分裂的阻滞作用,同时也可抑制低浓度紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡,可能是导致卵巢癌细胞对紫杉醇不敏感的关键分子机制之一.
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Aurora B基因沉默对卵巢癌细胞A2780紫杉醇化疗敏感性的影响
目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Aurora B基因表达对卵巢癌细胞A2780细胞紫杉醇化疗敏感性的影响.方法 采用RNAi方法,将不同浓度AURKB siRNA转入A2780细胞(实验组),同时设阴性对照组和空白对照组,并以不同浓度紫杉醇作用各组细胞.采用MTT检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白水平;Hoechst染色观察细胞凋亡.结果 A2780细胞转染不同浓度siRNA后,随着siRNA浓度增加,细胞存活率逐渐下降,至50 pmol/L时,实验组与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度紫杉醇处理各组细胞,随着紫杉醇浓度增加,细胞存活率明显下降,当紫杉醇浓度至10 μmol/L时,实验组与空白对照和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);50 pmol/L siRNA 转染A2780细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞凋亡率明显增加,与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);50 pmol/L浓度siRNA转染A2780 细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞内Caspase-3蛋白表达明显上调,细胞凋亡明显增加.结论 Aurora B的抑制可增强A2780细胞对紫杉醇的化疗敏感性,并使细胞凋亡增加.
