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人脐动脉内皮细胞和平滑肌细胞体外培养鉴定及缝隙连接通讯功能测定
目的:应用双光子激光扫描共聚焦显微镜鉴定体外培养的脐动脉内皮细胞(ECs)和平滑肌细胞(SMCs),应用荧光光漂白恢复技术(FRAP)测定血管ECs、SMCs之间的缝隙连接通讯(GJIC)功能.方法:人脐动脉ECs、SMCs分离培养,Ⅷ因子和SMα-actin相关抗原鉴定ECs和SMCs,应用FRAP技术测定血管内皮细胞、平滑肌细胞之间的GJIC功能,记录实时成像结果,应用动态比(M)计算漂白区域内标记荧光的分子中动态分子的比例.结果:第一组ECs和SMCs单独培养,选择漂白细胞与周围至少3个同种细胞相连接,SMCs被漂白后平均M值为31.79 ±5.69；ECs被漂白后平均M值为23.43 ±2.11；第二组ECs和SMCs混合培养,选择ECs和SMCs独立相连的2个细胞,SMCs被漂白后平均M值为14.47±3.28,ECs被漂白后平均M值为6.41±0.80.结论:FRAP实时动态恢复曲线可直接观察荧光恢复强度及速度,参照FRAP恢复曲线,M值可做为组间GJIC比较相对定量的可靠指标,通过检测证实ECs和SMCs之间存在GJIC,且荧光由ECs向SMCs方向的传递大于由SMCs向ECs方向的传递.
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缝隙连接细胞通讯的研究方法及其在经络研究中的可能运用
近几十年来,面对丰富多变的经络现象,研究者们几乎动用了所有的解剖学研究方法却收效甚微,致使一些人对经络之客观存在提出疑问,但也有人对现代解剖学研究方法产生怀疑.这是因为:应用现代生物物理学技术,已经证实了经络现象的客观存在,即经络是具有低电阻、高声传导、发光、高温等特性的.经络现象的客观存在已经被科学地证实,可是经络的实质和物质基础究竟是什么,却始终困扰着广大的科技工作者.本文在分析经络实质各种假说的基础上,探讨了缝隙连接细胞通讯与经络的可能关系及其研究方法在经络实质研究中的运用.
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荧光光漂白恢复技术在检测膀胱平滑肌细胞间通讯功能中的应用
目的探讨膀胱平滑肌细胞间通讯的功能变化.方法利用荧光光漂白恢复(FRAP)技术检测膀胱平滑肌细胞GJIC功能.结果在相同的时间内,对实验组和对照组膀胱平滑肌细胞漂白后平均荧光恢复率相比较,实验组显著高于对照组(P<0.05).结论 FRAP技术可以从功能上研究缝隙连接介导的细胞间通讯.
关键词： 荧光光漂白恢复技术 激光扫描共聚焦显微镜 膀胱平滑肌
