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细胞组学技术在心肌细胞凋亡研究中的应用
目的:利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、激光扫描细胞分析术(laser scanning cytometry,LSC)等细胞组学技术对心肌细胞凋亡特征进行研究.方法:缺氧缓冲液处理H9C2心肌细胞,建立体外心肌细胞凋亡模型,以常规DMEM培养为对照组,处理6h后收取细胞行Annexin V-FITC、PI染色,分别利用HCS和FCM检测,分析心肌细胞早、晚期凋亡以及坏死的比例.利用小鼠心脏左前降支结扎,建立心肌梗死在体模型,术后28d收取心脏,进行TUNEL染色,利用HCS和LSC分析心脏组织健存区、交界区和梗死区心肌细胞的凋亡.结果:缺氧缓冲液处理H9C2心肌细胞6h后,HCS和FCM方法均显示早期凋亡细胞缺氧组与DMEM组,差异有统计学意义,分别为[(17.69±2.85)vs.(5.31±0.86)％,P＜0.01]和[(12.18±0.61)vs.(3.08±0.15)％,P＜0.01],晚期凋亡与坏死细胞比例变化不明显,表明缺氧缓冲液处理6h主要诱导心肌细胞早期凋亡.小鼠心肌梗死28d后,HCS和LSC方法均显示心脏梗死区和交界区有凋亡细胞,梗死区更明显,整体凋亡率分别为6.08％和4.35％,健存区无细胞凋亡.结论:HCS和FCM方法能够可靠、稳定和量化评价心肌细胞凋亡,准确区分细胞早、晚期凋亡和坏死,两种方法结果一致；HCS和LSC方法还可分析组织水平的细胞凋亡；而LSC优势在于可明确凋亡细胞的组织定位.
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声带早期癌DNA分析及p53、Ki-67和bcl-X的表达
目的以声带原位癌和早期微小浸润癌为主要研究对象,探讨声带从良性到恶性病变各阶段中DNA倍体及基因表达的变化,并结合其临床生物学行为,深入了解其实质.方法对18例声带肿瘤性病变做激光扫描细胞DNA分析并进行随访.对62例声带病变,以声带原位癌(CIS)和早期微小浸润癌(EMIC)为主,与声带浸润性癌、声带息肉分别分为3组,检测p53、Ki-67和bcl-X的基因表达并作各组间对比.结果 DNA倍体分析表明CIS、EMIC和浸润性癌不同,前两者几乎都是二倍体,而后者90%为异倍体;随访结果示CIS、EMIC病人无1例死于肿瘤; 还发现DNA二倍体和有DNA凋亡峰的肿瘤患者预后好,而肿瘤呈异倍体的患者预后差.免疫表型:p53蛋白在声带肿瘤性病变中表达异常高;86%的CIS、EMIC和91%的浸润性癌都表达p53蛋白,阳性指数分别为2.35和2.26,同时此两组的Ki-67的阳性平均指数也分别为29%和27%,与声带息肉差异有显著性(P<0.01).另一方面,bcl-X的表达从良性病变到恶性病变呈递减态势,以浸润性癌中下降明显,与息肉病变差异有显著性(P=0.002).结论声带良性病变、CIS、EMIC及浸润性癌在基因表达和DNA倍体上表现有所不同,提示它们各自之间有本质的差别,声带原位癌的表现界于良恶性之间,在治疗上有必要提倡保守疗法.另外,p53和Ki-67的共同检测对癌变和癌的诊断有很大意义.
