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上调CDX2基因表达对人胃癌SGC-7901细胞miRNA表达谱及生物学功能的影响
目的:筛选上调尾型同源盒基因2(caudal type homeobox gene 2,CDX2)基因表达时人的胃癌细胞SGC-7901中差异表达的miRNA并预测其靶基因,并观察其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:提取瞬时转染48 h后空载体组(转染PEGFP-N1组)和转染组(转染PEGFP-N1-CDX2组)细胞的总RNA,应用miRNA芯片检测差异表达的miRNA,并通过Miranda、TargetScan、Mirtarget2软件预测其靶基因,通过Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析了解靶基因功能.CCK8法检测细胞增殖能力,划痕试验、Transwell小室、细胞黏附实验检测各组细胞体外迁移黏附能力.结果:PEGFP-N1-CDX2组较空载体组有59种差异表达的miRNA,其中25种miRNA发生2倍以上表达上调,34种miRNA发生2倍以上表达下调.通过Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析得到部分miRNA靶基因功能,这些靶基因参与了肿瘤的发生、发展、转移及预后.与对照组相比,PEGFP-N1-CDX2组的胃癌细胞生长、迁移和黏附能力均明显受到抑制(P＜0.05).结论:上调CDX2基因表达可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长,抑制其迁移黏附能力,CDX2基因的抗肿瘤作用可能与miRNA有关.
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尾型同源盒基因2基因表达对胃癌细胞生长影响的研究
目的 观察尾型同源盒基因2(Cdx2)基因过表达对胃癌细胞生物学性状的影响.方法 构建人Cdx2真核表达载体,并转染胃癌细胞MGC-803.实验分为四组:未转染组、转染pCMVHA组、转染pCMV-GAPDH-HA组、转染pCMV-Cdx2-HA组.应用荧光定量PCR检测各组Cdx2基因的表达情况,Western blot法检测各组Cdx2蛋白的表达情况,MTT法观测细胞增殖,透射电镜观察转染细胞形态学的改变,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡.结果 成功构建了pCMV-Cdx2-HA真核表达载体,在瞬时转染pCMV-Cdx2-HA质粒48 h的MGC-803细胞有较高水平的Cdx2基因mRNA和蛋白的表达;与未转染组、转染pCMV-HA组、转染pCMV-GAPDH-HA组比较,转染pCMV-Cdx2-HA组的胃癌细胞在转染72 h时生长受到明显抑制,G0/G1期比例上升,S期比例下降,胃癌细胞的凋亡率也明显升高(P＜0.05);转染pCMV-Cdx2-HA的胃癌细胞胞核消失,核染色质固缩、解体,内质网、高尔基复合体膨大成泡状.结论 Cdx2基因可明显抑制胃癌细胞的生长,提示Cdx2参与了胃癌的生长调控.
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Musashi-1和尾型同源盒基因2在胃黏膜肠上皮化生中的表达及意义
目的 探讨Musashi-1(Msi-1)和尾型同源盒基因2(CDX2)在不同形态胃窦黏膜肠上皮化生中的表达.方法 采用回顾性队列研究方法.收集2009年3月至2013年6月郑州大学第二附属医院收治256例胃炎[慢性非萎缩性胃炎(CNAG)46例、萎缩性胃炎伴肠上皮化生210例]患者的临床病理资料.标本取材由2名内镜科医师负责完成,标本送检,由3名病理科医师独立阅片进行病理学诊断.对萎缩性胃炎伴肠上皮化生标本进行胃镜下分型(局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型)和黏液染色检查分型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型);对标本进行免疫组织化学染色检测和免疫荧光双标染色检测.计数资料比较采用,检验.正态分布的计量资料以(x)±s表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验.结果(1)临床检查结果:胃镜分型:210例萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者中,局灶隆起型65例,疣状隆起型85例,“棉絮状”增厚或凹陷型60例.黏液染色分型:Ⅰ型肠上皮化生70例,Ⅱ型肠上皮化生75例,Ⅲ型肠上皮化生65例.(2)免疫组织化学染色检测结果:204例患者的标本(CNAG 36例、局灶隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生52例、疣状隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生68例、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生48例,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生分别为56、60、52例)进行免疫组织化学染色检测.在CNAG组织的腺体颈、峡部发现Msi-1少量阳性表达,在萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中表达呈阳性.Msi-1在CNAG、局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生标本中阳性表达率分别为25.0％ (9/36)、69.2％(36/52)、76.5％ (52/68)、75.0％(36/48),几者比较,差异有统计学意义(x2=31.850,P＜0.05).局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生Msi-1阳性表达率分别与CNAG比较,差异均有统计学意义(x2=16.655,25.714,20.677,P＜0.05).Msi-1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为71.4％ (40/56)、73.3％ (44/60)、76.9％ (40/52),3者比较,差异无统计学意义(x2=0.432,P＞0.05).CNAG组织中未发现在特定部位CDX2表达增强;在萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织的腺体表达明显.CDX2在CNAG、局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中阳性表达率分别为13.9％ (5/36)、80.8％ (42/52)、82.4％(56/68)、83.3％ (40/48),几者比较,差异有统计学意义(x2=65.973,P＜0.05).局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生CDX2阳性表达率分别与CNAG比较,差异均有统计学意义(,=38.289,45.496,39.886,p＜0.05).CDX2在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为89.3％ (50/56)、80.0％(48/60)、76.9％ (40/52),3者比较,差异无统计学意义(x2=3.102,P＞0.05).(3)免疫荧光双标染色检测结果:52例患者的标本(CNAG 10例、局灶隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生13例、疣状隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生17例、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生12例)进行免疫荧光双标染色检测.CNAG组织未发现Msi-1和CDX2双阳性共表达细胞.萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中可见杯状细胞周围Msi-1和CDX2双阳性共表达细胞明显增多.局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生中Msi-1和CDX2双阳性共表达率分别为41.4％±11.9％、43.7％± 12.7％、42.8％±12.7％,3者比较,差异无统计学意义(F=0.131,P＞0.05).Msi-1和CDX2双阳性共表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为33.8％±10.6％、43.8％±10.1％、51.0％±2.7％,3者比较,差异有统计学意义(F=9.817,P＜0.05);Ⅰ型分别与Ⅱ、Ⅲ型比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);而Ⅱ型与Ⅲ型比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Msi-1、CDX2、Msi-1和CDX2双阳性的表达与肠上皮化生的3种形态无关;Msi-1和CDX2双阳性共表达可能是肠上皮化生组织向胃黏膜瘤变过程的重要机制之一.
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尾型同源盒基因2过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901/DDP多药耐药性的影响
目的 探讨尾型同源盒基因2(Cdx2)过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901/DDP的多药耐药性的影响.方法 将SGC7901/DDP细胞分为实验组[Cdx2过表达重组慢病毒载体(pCMA-Cdx2-HA)处理]、空载体组[慢病毒载体(pCMA-HA)处理]、对照组(不做处理)3组.MTT法检测各组SCC7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测各组SGC7901/DDP细胞阿霉素的泵出蓄积量、细胞周期分布及凋亡情况;Western blot技术进一步检测Cdx2蛋白和多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达水平.组间比较采用方差分析.结果 SGC7901/DDP细胞感染慢病毒载体72 h后,转染效率达90％以上.实验组Cdx2蛋白的相对表达量为0.37±0.06,较空载体组的0.12 ±0.02和对照组的0.11±O.03明显升高,3组比较,差异有统计学意义(F=82.37,P＜0.05).实验组SGC7901/DDP细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂的半数凋亡浓度分别为(1.10±0.08) mg/L、(4.81 ±0.12) mg/L、(3.81 ±0.15)mg/L,均高于空载体组的(0.59±0.05)mg/L、(3.71±0.14) mg/L、(2.20 ±0.15) mg/L和对照组的(0.63±0.04) mg/L、(3.92±0.15) mg/L、(2.92 ±0.11)mg/L,3组比较,差异有统计学意义(F=158.75,98.06,188.78,P＜0.05).实验组阿霉素的泵出率为18.20％±0.12％,高于空载体组的7.22％±0.09％和对照组的8.79％±0.11％,3组比较,差异有统计学意义(F=146.31,P＜0.05).实验组G1期细胞的比例为52.2％±4.4％,明显低于空载体组的62.0％±5.0％和对照组的67.8％±3.3％;实验组S期的细胞比例为40.4％±1.5％,明显高于空载体组的25.6％±2.0％和对照组的21.8％±1.3％,3组细胞G1期和S期比较,差异均有统计学意义(F=17.08,236.83,P＜0.05).实验组细胞凋亡率为7.6％±1.3％,明显低于空载体组的11.1％± 1.1％和对照组的10.8％± 1.0％,3组比较,差异有统计学意义(F=16.29,P＜0.05).实验组中MDR1蛋白的表达量为1.85 ±0.18,高于空载体组的1.12 ±0.08和对照组的1.02 ±0.09,3组比较,差异有统计学意义(F=76.22,P＜0.05).结论 Cdx2基因的过表达可降低胃癌耐顺铂细胞SGC7901/DDP对化疗药物的敏感性,降低化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,增强胃癌多药耐药细胞的耐药性.
