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利用质谱技术对肝癌组织中自然呈递的MAGE表位进行鉴定
目的:利用质谱检测技术和差异比较方法,对肝癌组织中自然呈递的黑色素瘤抗原基因(melanoma antigen gene,MAGE)表位进行鉴定分析.方法:肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞取自同1例肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-1,MAGE-3理论侯选肽作为质谱筛选目标;利用弱酸洗涤法从肝癌细胞和肝细胞表面分离肽段,这些肝癌细胞和肝细胞都来自同1例肝癌患者.然后用HPLC分离纯化这些肽段,并将二种细胞的各峰段(fractions)进行差异比较,挑选出肿瘤特异性的峰段进行质谱分析.结果:经表位预测,共选出80条目标肽.从肝癌细胞样品中检测出2条自然呈递的MAGE抗原肽:FLWGPRALV(MAGE-3271-279)和FPSLREAAL(MAGE-1294-302),他们分别来自HCC的峰45.246和峰34.801,m/z分别为1 058.49和1 003.62.结论:这是首次从肿瘤组织中分离、鉴定出自然呈递的MAGE抗原表位.本实验证实质谱检测法可以对组织中自然呈递的肿瘤相关抗原表位进行快速准确检测,而检测的准确性和高效性对于表位的鉴定和肿瘤疫苗的设计都是非常重要的.
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肿瘤/睾丸抗原的研究进展
现今已经确认的肿瘤/睾丸(CT)抗原有40余种,通常仅在人类生殖系统中表达,也可在多种肿瘤如黑色素瘤、膀胱癌、肺癌和肝癌中表达.这些具有免疫原性的蛋白被认为是肿瘤疫苗的治疗靶标.作者对CT抗原的分类、表达和功能进行综述.
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对肝癌患者组织中自然呈递的MAGE-3表位进行鉴定和定量分析
目的尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析.方法肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;检测MAGE-3 mRNA的表达;肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 MAGE-3在肝癌细胞样品中表达阳性,在肝细胞中阴性;随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位抗原肽:FLWGPRALV(38-39拷贝/细胞),并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应.结论本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位,并揭示了该表位的潜在应用价值,同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的.
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非小细胞肺癌内TRAG-3抗原的表达及其临床意义
目的检测非小细胞肺癌内肿瘤抗原TRAG-3的表达情况,分析TRAG-3表达与术前新辅助化疗及肿瘤分期的关系.方法用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化的方法检测了共48例非小细胞肺癌患者的手术切除标本中TRAG-3抗原的表达.结果正常肺组织和癌旁组织中未见TRAG-3表达;48例肺癌标本中,共有26例(54%)非小细胞肺癌表达TRAG-3抗原,其中22例肺腺癌中有16例(73%)表达,而20例肺鳞癌中有8例(17%)表达,两者差异显著;术前化疗对TRAG-3的表达无显著影响;TRAG-3抗原的表达率与肿瘤的分期无关.结论非小细胞肺癌内有较高比例的TRAG-3抗原表达;TRAG-3抗原在非小细胞肺癌内的表达与术前化疗及肿瘤分期无关.
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肿瘤抗原TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的鉴定
目的寻找并鉴定TRAG-3来源的HLA-A2.1限制性CTL表位,为临床开展基于TRAG-3表位的特异性免疫治疗奠定基础.方法应用超基序和量化基序方案,预测TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位.用计算机分子模拟的方法,对预测表位进行分子模拟.用流式细胞仪分析测定各肽与HLA-A2.1分子的结合力.后,应用HLA-A2.1阳性健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)对其体外诱导的CTL效应进行鉴定.结果应用超基序和量化基序方案,预测出4个候选表位肽,用计算机分子模拟发现其中只有TRAG-3(37-45)不符合HLA-A2.1限制性CTL表位的特点.在上述4个九肽中,TRAG-3(58-66)与HLA-A2.1分子的结合力高.在进一步的CTL诱导实验中,发现TRAG-3(58-66)能够诱导健康志愿者PBMC产生特异性CTL.结论表位预测、计算机分子模拟、结合力分析和体外CTL诱导实验的一致性较好.4种方法一致认为,TRAG-3(58-66)(ILLRDA-GLV)为HLA-A2.1限制性CTL表位.该表位肽可望用于基于TRAG-3抗原多肽疫苗的临床实验.
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TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及结合力分析
目的寻找并鉴定TRAG-3来源的HLA-A2.1限制性CTL表位,为临床开展基于TRAG-3表位的特异性免疫治疗奠定基础.方法应用超基序和量化基序方案预测TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位;采用标准Fmoc方案合成侯选表位,RP-HPLC纯化、分析多肽,质谱鉴定各肽;后,用T2细胞株测定各肽与HLA-A2.1分子的结合力.结果超基序和量化基序方案预测出了4个侯选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽经纯化后纯度大于90%,各肽的相对分子质量与理论值一致;在 4个侯选表位肽中,ILLRDAGLV(58-66)九肽与HLA-A2.1的结合力强.结论表位预测的结果与结合力分析实验结果一致性较好,两者联合应用初步认为ILLRDAGLV(58-66)九肽为TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的可能性大.
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利用质谱技术对肝癌组织中自然呈递的MAGE-3表位的鉴定
目的 尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析,为恶性肿瘤的免疫治疗提供研发制备瘤苗的新方法.方法 利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段(肝癌细胞和肝细胞都来自同一名肝癌患者);HPLC进行纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3<,271-279>表位抗原肽:FLWGPRALV,并从患者外周血中检测出特异性的T细胞反应.结论 本实验首次从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3<,271-279>表位,并初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,这对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计都是非常重要的.
